Доставка по заказам принятым до 11:00 осуществляется в этот же день.

Доставка по заказам принятым после 11:00 осуществляется на следующий день.

Мы предлагаем 1 интервал доставки на ваш выбор: 14:00 — 21:00

Наши курьеры предварительно свяжутся с вами в момент вывезда по вашему адресу.

Время ожидания курьера на месте — 10 минут.

Стоимость доставки до 1999 сом составляет 100 сом. Стоимость доставки свыше 1999 сом — бесплатная.

Ниже приведена черта г. Бишкек для стандартной доставки:

Чуйский канал — 7 апреля — Каралаева — Масалиева — Садырбаева)

К ним относятся: Ак-Босого ж/м, Аска-Таш ж/м, Арча-Бешик ж/м, Ак-Орго ж/м, Ак-Тилек ж/м, Аламедин с., Алтын-Ордо ж/м, Ала-Арча 1,2,3 ж/г, Алтын-Бешик ж/м, Бакай-Ата ж/м, Достук м-н, Касым ж/м, Кара-Жыгач ж/м, Киргизия — 1, 2 ж/м, Керемет ж/м, Кошой — Ата ж/м, Колмо ж/м, Кок-Жар ж/м, Ордо ж/г, Орто — Сай с., Пишпек ж/м, Салам-Алик ж/м, Совмин ж/г, Селекционное с., Токольдош ж/м, Тенир-Тоо М-н, Умут ж/м , Хабитат ж/м, Чекиш-Ата ж/м, Чон — Арык с., Щербакова-Васильева ж/м,  Ынтымак ж/м.

Доставка по заказам принятым до 11:00 осуществляется в этот же день.

Доставка по заказам принятым после 11:00 осуществляется на следующий день.

Мы предлагаем 1 интервал доставки на ваш выбор:: 14:00 — 21:00 

Доставка будет осуществленна с 14:00 до 21:00. Наши курьеры предварительно свяжутся с вами в момент выезда по вашему адресу.

Время ожидания курьера на месте — 10 минут.

Стоимость доставки до 2499 сом составляет 130 сом. Стоимость доставки свыше 2499 сом — бесплатная.

К ним относятся: 

Ак-Бата  ж/м, Ак-Ордо ж/м, Ала-Тоо м-н, Аламедин — 1 м-н, Восток с., Дордой рынок, Келечек ж/м, Кок-Жар с., Лебединовка, Маевка с., Нижняя Ала-Арча, Новопавловка с., Пригородное с., Рухий — Мурас ж/м, Учкун — 1,2 ж/м, Тунгуч м-н, Эне-Сай ж/м, Красный строитель ж/м

Доставка по заказам принятым до 11:00 осуществляется в этот же день.

Доставка по заказам принятым после 11:00 осуществляется на следующий день.

Мы предлагаем 1 интервал доставки: 14:00 — 21:00

Доставка будет осуществленна с 14:00 до 21:00. Наши курьеры предварительно свяжутся с вами в момент выезда по вашему адресу.

Время ожидания курьера на месте — 10 минут.

Стоимость доставки до 2999 сом составляет 150 сом. Стоимость доставки свыше 2999 сом — бесплатная.

В регионы, расположенные дальше чем указанные выше — доставка на данный момент не осуществляется. В ближайшем будущем доставка будет доступна для более отдаленных регионов. ​

признаки, лечение. Причины дефицита в организме

Кальций, бесспорно, крайне важный минерал, ведь это одна из ключевых составляющих костной ткани. Но его обмен в организме тесно связан с количеством фосфора, которое получает животное с кормом, а также с витаминами D и С. Первый — традиционно называют «антирахитическим», второй — помогает оптимизировать структуру тканей кости, кстати, его (витамин C) собаки способны синтезировать самостоятельно.

Мы думаем, что из вышесказанного становится понятно, что соблюдение баланса минералов и витаминов в рационе в соответствии с возрастом и особыми потребностями питомца — очень важно для любой собаки или кошки.

Избыток кальция точно так же вреден, как и его нехватка, а в отдельные периоды жизни, особенно для крупных щенков, может крайне плохо сказаться на их здоровье. Не стоит также забывать и ещё один момент: для того чтобы полученный per os и усвоенный в желудочно-кишечном тракте кальций включился в состав костной ткани, каждому питомцу необходим достаточный уровень двигательной активности.

Ключевое слово здесь — умеренность, то есть важно дозированное движение с переменной скоростью на прогулках, а не постоянное лежание на диване или, наоборот, тяжелые физические нагрузки.

Чем опасен переизбыток?

Если крупный щенок в период роста ест промышленный корм для щенков с кальцием, плюс получает дополнительное питание (к примеру, кальцинированный творог), да ещё ему в добавок скармливают таблетированные минеральные добавки, то у таких животных может развиться зачастую необратимый пищевой гиперпаратиреоз — гормональное нарушение, которое по своим проявлениям очень напоминает рахит.

По данным FEDIAF (Европейской Федерации производителей кормов для домашних животных), высокий уровень кальция в рационе оказывает крайне отрицательный эффект на развитие скелета у собак крупных пород, особенно на ранних стадиях развития. Именно поэтому производителям рекомендуется строго контролировать содержание кальция в кормах, предназначенных для крупных щенков и щенков-гигантов.

Для этого FEDIAF выпустило регламент — для приличных компаний это своего рода ГОСТ — для определения допустимого уровня кальция в кормах для собак и кошек.

Итак, Европейской Федерации производителей кормов для домашних животных даёт производителям следующие рекомендации по дозировкам кальция в готовых полнорационных кормах в пересчёте на 100 г сухого вещества корма:

• В кормах для взрослых собак — минимум 0,50–0,58 г, максимум 2,5 г;
• В кормах для щенков в раннем периоде развития (младше 14 недель), беременных и лактирующих сук – минимум 1 г, максимум 1,6 г;

В кормах для щенков в более поздний период развития (начиная с 14 недель и старше) дозировка кальция должна отличаться в зависимости от размеров породы:

• для щенков пород, взрослый вес которых менее 15 кг, в течение всей фазы позднего роста (с 14 недель) — минимум 1 г;
• для щенков пород, взрослый вес которых более 15 кг — продолжать эту дозировку до достижения возраста 6 месяцев, и только после этого момента снизить уровень кальция до 0,8% в сухом веществе корма.

Что касается растущих щенков, уровень кальция в 0,8 г на 100 г сухого вещества корма был определён как средний оптимальный. Тем не менее, по этому же ГОСТ, кальций в кормах для собак отдельных пород, особенно в фазу быстрого роста (особенно у тех пород, у которых потребность в энергии невысокая), не должен быть выше указанного значения (0,8 на 100 г), это для них предельно допустимый уровень.

В более поздний период роста содержание кальция в кормах должно быть в пределах до 1,8% сухого вещества корма. Это касается всех пород собак, включая и гигантские, кроме датских догов. Эта порода считается наиболее чувствительной к уровню кальция, поэтому таких подростков желательно кормить рационом с максимальным показателем кальция — 1,6 г на 100 г сухого вещества корма.

В комментариях FEDIAF сказано о том, корма, богатые кальцием (где его уровень приближается к указанному максимуму), должны быть сбалансированы и по другим показателям — могут быть увеличены, в частности, дозировки цинка и меди.

Каким должен быть корм для кошек с кальцием?

В кормах для взрослых кошек официально определено только минимальное содержание кальция: 0,59 – 0,79 г. Максимум не определён, при этом корм для кошек с кальцием должен иметь максимально допустимое соотношение по «костным» минерала как два к одному: Ca: P — 2:1.

Корм для котят с кальцием, а также рационы беременных и лактирующих кошек (как правило, производители объединяют эти три категории) должен содержать минимум 1 г этого минерала. Максимум также не определён, а вот максимальное соотношение кальция и фосфора будет ниже, чем у взрослых кошек: Ca:P – 1,5:1.

Организм живого существа состоит из огромного количества клеточного материала, надежной опорой для которого выступает скелет. Для формирования и развития костной системы ведущую роль играет кальций. В нашей статье мы расскажем, почему важен кальций для собак, и как правильно обеспечить им организм питомца.

Кальций не только основной строительный элемент, участвующий в формировании костей, зубов и когтей, но и необходимый для обновления организма компонент. Поэтому его дефицит в организме чреват проблемами с конечностями, ухудшением внешнего вида и другими проблемами со здоровьем животного.

Организм собаки нуждается в кальции

От наличия кальция в организме также зависят регуляции и других жизненно важных процессов:

• свертываемость крови;
• проведение нервного импульса и возбудимость ЦНС;
• рост клеток;
• сохранение нормального тонуса сосудов;
• сокращение сердечных мышц;
• улучшение состояния шерстяного покрова, когтей и зубов, а также укрепление суставов;
• активность гормональной системы, ферментов;
• кератизация в коже.

Видео «Как и чем кормить собаку»

В этом видео эксперт расскажет о правильном питании для собаки.

Причины и признаки дефицита

Причин развития гипокальцемии в организме собаки может быть несколько. Каждая из них может спровоцировать серьезные последствия, а вот совокупность нескольких может иметь летальный исход:

1. Отсутствие правильно сбалансированного рациона, в котором отсутствуют необходимые минеральные вещества и витамины. В группы риска, которые страдают от недостатка кальция, входят щенки и молодые животные. Минерализация костной ткани не может нормально проходить без микроэлементов (кальций, фосфор) и витамина D. Рацион, состоящий преимущественно из пищи растительного происхождения, не может восполнить потребность в данных полезных компонентах. Поэтому при таком кормлении в организме начинается нехватка минерала. Особенно остро чувствуется недостаток у собак крупных пород.
2. Тетания. После родов или в период лактации у суки часто возникает острый недостаток кальция. Весь запас минера вымывается из организма зачастую уже в период беременности. Сыворотка крови истощается и возникает характерная симптоматика. Чаще всего от заболевания страдают мелкие породы.
3. В результате появления эндокринного заболевания, которое сопровождается снижением синтеза гормона, способствующего всасыванию кальция.
4. В результате увеличения уровня фосфора в организме, а также метаболические нарушения в синтезе витамина D. Как результат, снижение уровня содержания минерала в крови. Обычно такая проблема возникает при почечной недостаточности.

Похожая статья: Какими продуктами можно и нельзя кормить собаку

Симптомы:

• проблемы с костями (хрупкость, ломкость), шерстяным покровом, когтями и зубами;
• непроизвольные частые судороги, тремор мышц, нарушение координации;
• дезориентация, апатия;
• снижение аппетита или полный отказ от пищи;
• тахикардия, одышка, повышение температуры;
• перевозбуждение, агрессия;
• рвота и диарея.

Избыток вещества

Проблема может заключаться не только в дефиците, но и в избытке минерала. Причем избыток вреден для собак любых размеров и пород. Излишек не выводится из организма естественным путем, а продолжает циркулировать по кровеносным сосудам, откладываться в костных и хрящевых тканях. В результате возможно возникновение остеохондроза, гипертрофической остеодистрофии и искривление костей. Избыточное количество кальция мешает усваиваться другим полезным минералам, что провоцирует минеральную недостаточность.

Как рассчитать суточную норму

Многие владельцы животных думают, что рассчитывать необходимую дозу того или иного полезного ингредиента сложно. Но это далеко не так. Владельцам, которые кормят своих питомцев качественными промышленными кормами, не нужно беспокоиться совсем. Все необходимые полезные вещества из расчета возраста и других характерных особенностей животного заложены в состав корма.

При производстве промышленных сухих и мягких кормов ведется контроль над соблюдением минимальной и максимальной нормой кальция. Расчет ведется таким образом, чтобы покрывать суточную потребность животного в минерале. Для щенков норма составляет 320 мг на 1 кг веса, с возрастом показатель снижается до 120. Норма может быть повышена для старых или больных питомцев.

Восполнить норму кальция для животного натуральными продуктами не представляется возможным. Даже если кормить собаку высококачественным мясом, то понадобится более 28 кг в день. Поэтому при натуральном кормлении просто необходимо давать собаке пищевые добавки и витаминные комплексы.

Что делать, если собаке не хватает кальция

В сложных или запущенных случаях прибегают к неотложной медикаментозной терапии. Во всех остальных помогут пищевые добавки и коррекция меню.

Похожая статья: Какие крупы можно давать собакам и чем кормить не стоит

Медикаментозное решение проблемы

В сложных ситуациях нужно немедленно восполнить в организме не только недостаток минерала, но и поддержать сердце. Для инъекций назначают растворы глюконата и хлористого кальция. Препараты вводятся очень медленно внутривенно или с помощью капельницы. Доза рассчитывается индивидуально — от 0,5 до 1,5 мл на 1 кг веса животного. Дополнительно для поддержки сердца вводится «Сульфокомфокаин» или «Валокардин».

Пищевые добавки

Употреблять пищевые добавки нужно очень осторожно, ведь нарушение инструкции по употреблению или неправильный выбор могут спровоцировать развитие кальцификации почечной лоханки.

Витаминно-минеральные комплексы назначаются только при хронической проблеме или после снятия симптомов острой гипокальцемии. Выбирать такие комплексы следует только по рекомендации ветеринара и четко по назначенной им дозировке.

Коррекция рациона

При появлении проблемы необходимо скорректировать меню питомца. Специалисты рекомендуют уменьшить часть мясных продуктов и увеличить молочную составляющую. Свежее молоко не подойдет, а вот творог, сметана, кефир, ряженка — оптимальный вариант.

При покупке собаки заводчики всегда дают рекомендации, советы и наставления по кормежке, уходу, воспитанию. Ответственные хозяева еще загодя изучают теорию, что бы потом, на практике, меньше возникало вопросов. Но как бы прилежно не была выучена матчасть, по мере роста собаки они все равно появляются.

Все мы знаем, что правильное и полноценное питание — это основа здоровья. Но оказывается мало давать собаке просто свежую и подходящую пищу, в вопросе кормежки надо быть более щепетильным и дотошным. Вот взять такой макроэлемент как кальций — его недостаток или избыток может легко «испортить собаку». Щенок неправильно сформируется, появятся различные дефекты, пострадает общий внешний вид, возможно и ухудшение характера. И не думайте, что такое бывает только у собак со скудным питанием, подобные проблемы встречаются и среди заботливых владельцев и их обласканных вниманием питомцев.

Проблема заключается в том, что нужно не просто давать или не давать кальций собаке, важно давать его в правильном виде и соотношении с другими веществами, только в этом случае макроэлемент дойдет по адресу и принесет на пользу.

Наверное каждый сможет найти хоть несколько причин, для чего животному нужно это вещество: для правильного формирования костного скелета, чтобы зубы были крепкими, а шерсть блестящей и густой. Но кальций требуется и в других целях, он участвует в процессе свертываемости крови, сокращении мышц, влияет на состояние нервной системы.

Кому нужен кальций

Кальций нужен собакам всех возрастов, правда многое зависит от того как они питаются. Но особенно он важен для щенков, собак, которые продолжают расти и развиваться, для беременных и кормящих сук.

Последствия недостатка кальция

— рахит;
— задержка роста;
— запоздалая смена зубов;
— недоразвитие или неправильное развитие костного скелета;
— дефекты экстерьера (не стоят уши и т.д.)

Последствия избытка кальция

— искривление лучевых костей;
— остеохондроз;
— гипертрофическая остеодистрофия и др.

Помните, что избыток кальция не выводится из организма!

Уровень кальция, а также фосфора, регулируется двумя гормонами — паратгормоном и кальцитонином. Простым языком, паратгормон контролирует уровень кальция в костях, при избытке выводит его в кровь. Постоянное сверхмерное поступление кальция в организм подавляет выработку этого гормона, вследствие чего кости начинают уплотняться, утолщаться, хрящи работать под большой нагрузкой что в итоге приводит к болезням опорно-двигательного аппарата. Также избыток кальция вызывает вторичную минеральную недостаточность, так как препятствует полноценному усвоению меди, цинка, фосфора, магния. Кальцитонин же действует как антагонист паратгормона и тем самым только ухудшает картину.

Кальций для щенков

Поскольку кальций является основным строительным элементом костного скелета (костная ткань на 99% состоит из кальция), щенятам он требуется в достаточно большом количестве — 320 мг на 1 кг веса в сутки, постепенно с возрастом дозировка снижается до 120 мг.

Высчитывание дозировки кальция для своей собаки многим хозяевам кажется делом слишком сложным. Чтобы понять, сколько и в каком виде давать питомцу макроэлемент, надо отталкиваться от того, на каком виде питания находится щенок или взрослая собака.
Животные, которые получают качественный сбалансированный корм, не нуждаются в дополнительном внесении в рацион кальция, особенно это касается питомцев, растущих на специализированных кормах для щенков и молодых собак. Эти корма уже обогащены дополнительным количеством кальция, просто следуйте рекомендациям производителя, которые указанны на упаковке.

Для контроля качества продукции были установлены минимальная и максимальная нормы кальция в сухих кормах. Для расчета берется сухой корм энергетической ценностью 3500-4000 Ккал на 1 кг и влажностью 10%: достаточным считается содержание кальция 0,9-1%, в таком объеме он полностью покрывает потребности щенка. При таких показателях выходит около 2,9 г на 1000 Ккал. Верхняя планка при таких же параметрах корма составляет 2,5% или 7,1 г кальция на 1000 Ккал.

Кальций для щенков и собак на натуральном корме

Несколько сложнее отследить достаточно ли собака потребляет кальция, если она находится на натуральном корме. Только представьте, что даже если пес будет кушать исключительно свежее мясо, то для удовлетворения суточной потребности в кальции ему понадобится 30 кг! В овощах и фруктах кальция содержится в несколько раз больше, но выстроить на них основной рацион не получится. Животные на натуралке нуждаются в дополнительном приеме препаратов кальция, для этого используют специальные витамины или комплексы для собак, которые содержат кальций и другие вещества в нужном объеме.

Принимать любые препараты надо строго по инструкции, желательно проконсультироваться с ветеринаром, чтобы при приеме учесть все нюансы: вес, особенности породы, скорость роста. Взрослым собакам можно вводить в рацион костную муку и порошок из толченых яичных скорлупок. Но не забывайте, что кальций усваивается только вместе с фосфором и витамином Д, поэтому в рацион надо добавить и продукты, содержащие эти вещества. Если этого не сделать, то на лицо получится распространенная ошибка неопытных собачников: вроде как собака дополнительно макроэлемент получает, хозяин спокоен, а на деле кальций в дефиците.

Надо отметить, что пищеварение взрослой собаки может подстраиваться под уровень кальция. Если его становится больше, чем нужно, то собака начинает его усваивать в меньшей мере, при дефиците же усвояемость усиливается. Но это не значит, что взрослая собака без последствий сможет перенести длительное чрезмерное или недостаточное поступление макроэлемента. У щенков же такая способность к адаптации отсутствует, и обычно усвояемость кальция довольно высока, поэтому важно соблюдать рекомендованные нормы.

Щенкам и собакам до трех лет можно давать кальцинированный творог, молочные продукты, а из рациона взрослых собак молочку лучше убрать, так как они ее почти или полностью не усваивают. Кальцием богаты такие продукты как орехи, горох, фасоль, овсянка — их и следует внести в меню.

Корм предназначен:

• Для гармоничного развития скелета, опорно-двигательного аппарата и зубов щенков и молодых собак всех пород.

• Для компенсации недостатка активных ингредиентов, содержащихся в корме, в рационах взрослых собак, в особенности сук в период беременности и лактации.

Кальций – это элемент неорганической природы, участвующий во многих биохимических процессах организма собаки. Он отвечает за возбудимость нервной системы, формирование зубов и костной ткани. Вещество влияет на свертываемость крови, сокращаемость мышц, передачу сердечных ритмов. Кальций участвует в формировании организма щенков, поддерживает здоровье взрослых псов, предотвращает атрофию суставов престарелых собак. Основной причиной дефицита кальция выступает неправильное питание. Корма эконом класса изготавливаются из недорогого сырья без включения полезных биодобавок. Кроме того, некоторые болезни питомцев ухудшают всасывание кальция в кровь. Кальций жизненно необходим для щенков всех пород. Его дефицит приводит к приостановке роста, поздней смене молочных зубов, нарушениям формирования опорно-двигательного аппарата, рахитам. Щенкам назначаются соответствующие функциональные корма, если они отстают в развитии, имеют проблемы с зубами и костями.

Также, особенно часто гипокальциемия развивается у сук в период лактации. При этом в молоке находится достаточное количество этого элемента.

Для решения проблемы гипокальциемии недостаточно просто восполнить недостаток кальция в организме. Необходимо восстановить гармоничный баланс содержания кальция, фосфора и витамина Д3, стимулировать процессы кальциево-фосфорного обмена в организме собаки. Для это предназначен функциональный корм КОРИС. КАЛЬЦИЙ ДЛЯ ЩЕНКОВ.

В его состав входит:

Дикальцифосфат — является основным строительным материалом для костей и зубов – основной источник кальция и фосфора в корме.

Лактат кальция — кальциевая соль молочной кислоты – особенно легко усваиваемая организмом собаки форма кальция. Кроме того, он повышает защитные функции организма, активизирует ряд ферментов, способствующих повышению перевариваемости пищи, позволяет сохранять постоянную кислотность в желудочно-кишечном тракте, подавляет активность условно-патогенной микрофлоры.

Метионин цинка — Цинк играет жизненно важную роль во многих функциях систем организма собаки — в росте зубов и костей, минерализации, нормальном развитии репродуктивных органов. Цинк является компонентом различных ферментных систем, которые необходимы для синтеза и обмена белков и генетических материалов. Красные кровяные клетки также нуждаются в цинке для правильной передачи углекислого газа. Метионин цинка — минерал в комплексе с органической молекулой, — такая форма минералов значительно лучше усваиваются организмом, чем минералы в неорганических соединениях.

Мальтодекстрин – быстрый углевод, который получают путем ферментативного расщепления растительного крахмала (глюкозы). Его функция – стимулировать обмен веществ.

Другие активные вещества – витамины (А, С, Е, Д), содержащиеся в корме — благотворно воздействуют на общее состояние собаки, координируют метаболизм и биохимические процессы, оказывают общеукрепляющее действие, повышают иммунитет.

«КОРИС. КАЛЬЦИЙ ДЛЯ ЩЕНКОВ» — функциональный корм для собак всех пород, возраста от 7 недель, таблетированный.

Форма выпуска: Таблетированная гранула круглой формы, белого цвета, массой 1,0г. допускаются включения — от бежевого до коричневого цвета.

Данные о составе: Дикальцифосфат, Мальтодекстрин, Лактат Кальция, Метионин Цинка, Витамины, вспомогательные вещества.

Показатели: На 100г. продукта: Сырой протеин Ca – 17.00%, P – 11.40%, Zn – 37,5мг, Витамин А – 7,5мг, Витамин С – 250мг, Витамин Е – 500мг, Витамин Д3 – 25мкг. Энергетическая ценность – 253 кКал.

Ограничения: Индивидуальная непереносимость продукта или его компонентов, превышения рекомендуемой дозировки.

Срок хранения: 24 месяца с даты изготовления (см. дату на упаковке).

Количество в упаковке (масса нетто): 110 шт. (110г.), 220 шт. (220г), 440 шт. (440г.)

Рекомендации по применению: Щенкам, молодым собакам с возраста 7 недель до 15 месяцев, сукам в период лактации при питании промышленными сухими полнорационными кормами — 1 таблетка на каждые 5кг веса собаки в день, при питании влажными кормами и кормами домашнего приготовления — 2 таблетки на каждые 5кг веса собаки в день. Продолжительность приема у щенков — минимум до окончания смены зубов, далее для щенков крупных пород рекомендуем перейти на ФК КОРИС. ДЛЯ СВЯЗОК И СУСТАВОВ. Для лактирующих сук весь период лактации плюс 1-2 месяца. При проявлениях признаков гипокальцемии — возобновить прием.

Внимание! Максимальная дозировка – 12 таблеток в день.

СДЕЛАНО В РОССИИ. ГОСТ Р 55985.

Кальций фирмы 8в1 – это лучшее средство для укрепления костей у молодых щенков. У меня собаки породы кавказская овчарка, каждую весну девочка приносит мне щенков и как раз для них я и покупаю кальций. Несмотря на хороший рацион и сбалансированное питание, малышам нужна дополнительная подкормка – вес у них солидный и чтобы кости могли выдержать нагрузку щенкам жизненно необходимо давать кальций. Уже много лет я покупаю кальций фирмы 8в1 и считаю эти витамины лучшими из тех, что есть на полках в наших зоомагазинах. Во-первых, таблетки идут в очень удобной дозировке – до 5 кг дается по 0,5 таблетки, а с 5 до 10 кг по целой таблетке. Во-вторых, сами таблетки приятно пахнут и щенки с удовольствием едят их. А в третьих, они немного стоят, но реально очень эффективны. Всего я даю по весу собаки в течение месяца после того, как они начинают самостоятельно есть и меньше потреблять материнского молока. Примерно этот период наступает в 6-7 недель, раньше давать кальций необходимости нет – щенки получают все необходимое из материнского молока. Будущим владельцам моих щенков я также рекомендую повторить курс кальция, когда щенку исполняет 6 месяцев и 1 год. Это необходимо если они хотят чтобы собака была здорова и не испытывала проблем с развитием костяка.

Ответить [x] Отменить ответ

Полгода назад я стала счастливой обладательницей щенка породы немецкий боксёр. Это порода собак достаточно крупная, мощно сложена, с широким костяком. Конечно, чтоб мой щенок вырос здоровым и крепким, необходим не только хороший корм, но и отличные витамины. Владелец питомника порекомендовал мне хорошие витамины, которые он дает своим собакам, а именно Эксель Кальций / Excel Calcium. Их я и купила своему любимцу и давала каждый день по 1 штучке. Период смены зубов у малыша прошел очень быстро и успешно с этими чудесными витаминками! Щенок очень быстро подрос, сейчас весит уже 26 килограмм, крепко сложен. Уверена, что эти таблеточки с кальцием нам очень помогли, так что всем советую! Круглые, белые, очень приятно пахнут (зефирками, мне кажется), щенок их очень любит, ему вкусно. Давала витаминки по такому курсу: 4 недели каждый день по 1шт, далее перерыв на 4 недели. Так рекомендует наш вет.врач. Могу сказать, что витамины определенно качественные и хорошие, цена не завышена для такой пользы.

Ответить [x] Отменить ответ

Выписал нашему котенку Эксель Кальций / Excel Calcium (витамины) ветврач. После того, как котенок британец был неправильно нами кормлен (котенку давали вареное мясо птицы, не содержащее в себе ничего полезного для молодого и подрастающего организма. Мясо было просто «пустышкой») и ослаб в суставчиках. Решением ветврача для молодого и подрастающего организма котенка давать в употребление в пищу Эксель Кальций / Excel Calcium (витамины) в толченом виде уже с правильной пищей.
У котенка не возникло дискомфорта при употреблении пищи с кальцием. На протяжении месяца котенок употреблял толченый препарат и окреп. Молодые зубки и кости стали крепкими. Сейчас он прекрасно и бодро себя чувствует.

Ответить [x] Отменить ответ

Витамины Excel Calcium мы приобрели для своего щенка немецкой овчарки. Посоветовал нам их ветеринар, а в последствии мы не раз слышали хвалебные отзывы и от других владельцев собак. Производитель этого препарата очень известный и славится отличным качеством. Кальций из этих таблеток хорошо усваивается, так как в составе есть витамин Д.
Применяли мы эти витамины в период активного роста щенка и при смене зубов. В это время растущий организм как никогда нуждается в кальции и фосфоре, а этот препарат отлично помогает укрепить зубки и кости. Особенно рекомендую его тем собакам, которые питаются натуралкой, ведь самим очень сложно подобрать меню, в котором будут все необходимые вещества в нужных количествах.
Сами таблетки имеют белый цвет и приятный запах. Собака ест их с удовольствием, хотя иногда бывают моменты, когда она отказывается от них, на это время мы обычно прерываем курс.
Результатом применения витаминов Excel Calcium мы остались довольны. Порадовала цена и качество препарата.

Ответить [x] Отменить ответ

Важность витамина D3 в рационе вашей собаки

Большинство статей, которые я пишу, посвящены диетам из свежих продуктов и важности добавления определенных добавок в рацион вашей собаки для их общего хорошего здоровья. Сырые и домашние блюда обеспечивают большую часть питательных веществ, необходимых вашей собаке для хорошего здоровья, но важно понимать, что некоторых питательных веществ, необходимых нашим собакам, недостаточно в кормах, которые мы кормим, поэтому добавление добавок важно.Важным витамином, которому не всегда уделяется достаточно внимания, является витамин D3, поэтому я собираюсь поговорить о важности этого витамина и о том, почему он необходим для хорошего здоровья.

Есть водорастворимые и жирорастворимые витамины. Водорастворимые витамины, такие как витамины B и C, легко выводятся из организма. Однако жирорастворимые витамины, такие как витамины А и Е, сохраняются в организме собаки. Витамин D3 (холекальциферол) также является жирорастворимым витамином и, как витамины А и Е, любой избыток находится в печени и кровотоке.

Многие люди ассоциируют витамин D с солнечным светом. Хотя люди могут легко усваивать витамин D3 от солнца, это не относится к нашим собачьим друзьям. Из-за густой шерсти собак и жира на их коже они плохо усваивают витамин D от солнца. Собаки должны получать витамин D3 в основном из своего рациона. [I]

Наиболее частым преимуществом витамина D является его роль в усвоении кальция организмом, что предотвращает такие заболевания, как рахит, при котором кости становятся волокнистыми.Витамин D3 также помогает предотвратить остеопороз, мышечную слабость, диабет, сердечные заболевания и высокое кровяное давление. Кроме того, он помогает при кожных заболеваниях, таких как витилиго, то есть потеря пигмента. Совсем недавно было обнаружено, что витамин D3 помогает при аутоиммунных заболеваниях, воспалительных заболеваниях кишечника и раке, поскольку помогает некоторым химиотерапевтическим препаратам работать более эффективно.

http://vdilab.com/page.php?id=76

http://www.news.cornell.edu/stories/2008/04/cornell-studies-using-vitamin-d-cancer-prevention

http: // www.crvetcenter.com/vitamind_cancer.php

http://ovc.uoguelph.ca/sites/default/files/users/ovcweb/files/VitDstudyforveterinariansICCI-website.pdf

Исследования также показали, что собаки с застойной сердечной недостаточностью обычно имеют низкий уровень витамина D3 в сыворотке крови.

https://www.vitamindcouncil.org/vitamin-d-news/new-study-finds-vitamin-d-deficiency-related-to-congestive-heart-failure-in-dogs/

Слишком много витамина D3 или возможная передозировка витамина всегда была проблемой.Во время моего исследования D3 многие статьи предупреждали об этой проблеме. Однако наиболее частой причиной передозировки было употребление собаками крысиного яда. Большинство ядов для крыс содержат чрезвычайно высокие дозы витамина D3, который вызывает «кровотечение» и смерть грызунов. Было бы очень трудно дать собаке такую ​​высокую дозу витамина D. Даже предлагая гораздо более низкую токсичную дозу, ее нужно было бы принимать ежедневно в течение многих месяцев, чтобы достичь опасных эффектов. В редких случаях это происходило с коммерческими кормами для домашних животных, где были допущены ошибки в количестве витамина D3, добавляемого в корм для домашних животных.

В статье на веб-сайте Pet Education они заявляют: «Недостатки довольно распространены, а токсичность редко, если вообще присутствует». Таким образом, можно сделать вывод, что дефицит витамина D является главной проблемой, и это вызывает крайнюю озабоченность у щенков. Им нужен витамин D3, чтобы помочь в росте здоровых костей, развитии зубов, иммунитете, здоровье сердца, развитии нервов и мышечном тонусе. Тем не менее, взрослым собакам также может быть полезен витамин D3 для здоровья сердца, иммунитета, защиты от аутоиммунных заболеваний и ВЗК, а также для профилактики рака.

http://www.peteducation.com/article.cfm?c=2+1659&aid=710

Сколько витамина D3 следует давать собакам? Витамин D3 не всегда легко найти в продуктах питания, а собаки имеют небольшую способность поглощать витамин D3 от солнца. В дикой природе собаки имеют большую способность находить витамин D3 в пище, потому что они едят мясо органов и кровь своей добычи, оба из которых содержат D3. Мы избегаем употребления слишком большого количества печени, потому что это богатая пища. Избыточное количество может вызвать диарею и расстройство желудка.В мясе, которое мы покупаем для наших собак, почти не было крови. Поэтому витамина D3 не так много в продуктах, которые мы кормим наших собак.

Рекомендуемая доза витамина D3 для вашей собаки составляет 227 МЕ на фунт подаваемого корма. Токсическая доза составляет более 2722 МЕ на фунт пищи; однако для достижения опасного уровня токсичности эту дозу придется вводить в течение нескольких месяцев.

Рекомендуемая дозировка витамина D3

Эти дозы витамина D3 безопасны. Помните, что , дозировка основана на количестве корма, которое вы кормите своей собаке, а НЕ на весе вашей собаки! В определенных ситуациях, таких как болезнь сердца, рак, аутоиммунное заболевание или ВЗК, я могу удвоить рекомендуемую дозу.

К продуктам с хорошим уровнем витамина D относятся:

• Консервированный лосось
• Консервированная скумбрия
• Консервированные сардины
• Обогащенные молочные продукты, такие как йогурт и козье молоко.
• Печень говяжья
• Яичные желтки

Важно ежедневно кормить собаку хотя бы одним из этих видов пищи вместе с адекватными добавками.Хорошими добавками, которые содержат нужное количество витамина D3, являются Berte’s Daily Blend и Berte’s Immune Blend. Оба продукта содержат 400 МЕ витамина D3 на столовую ложку (для собак большого размера) и выпускаются в форме порошка, который приятен на вкус и очень легко добавляется в сырой или домашний рацион.

Добавление витамина D3 в количестве, указанном в статье, и добавление продуктов, богатых витамином D, в рацион вашей собаки поможет сохранить здоровье костей и зубов и может помочь предотвратить сердечные заболевания, аутоиммунные проблемы, проблемы с пищеварением и рак.И помните, витамин D3 важнее всего для растущих щенков!

Happy Spring и Happy Пасха !

Для многих это была долгая, холодная и снежная зима.

Вот к Апрель весна цветы
и взять свою собаку на длинный , счастливый !

Как насчет садоводства?

Солнечные ванны

И много времени для игр!

1. [i] How KL, Hazewinkel HA, Mol JA.Зависимость кошек и собак от витамина D из-за недостаточного кожного синтеза витамина D. Общая и сравнительная эндокринология 1994, 96 (1): 12-8

Вашей собаке нужен витамин D, но слишком много может быть токсичным

Недавние отзывы кормов для собак вызвали тревогу по поводу опасностей диет, содержащих слишком много витамина D. У собак высокие уровни этого витамина могут вызвать рвоту и проблемы с суставами. , почечная недостаточность и даже смерть. Итак, сколько витамина D должна получать ваша собака? И почему большие суммы так опасны?

Отравление витамином D

Как у людей, так и у собак витамин D поддерживает множество аспектов хорошего здоровья.Но для собак высокий уровень этого витамина может быть токсичным. В зависимости от того, как долго и как долго собака подвергается воздействию витамина D, отравление витамином D может вызывать различные симптомы:

• повышенная жажда
• потеря аппетита
• чрезмерное слюнотечение
• диарея
• рвота
• похудание
• совместных выпусков

Самая известная роль витамина D в организме — регулирование усвоения кальция и фосфора.Вот почему это так важно для здоровья костей. Но слишком много витамина D может привести к слишком большому количеству кальция, что опасно, поскольку заставляет ткани тела затвердевать (кальцифицироваться).

Сердце, артерии, желудочно-кишечный тракт и почки особенно подвержены повреждению в результате такого затвердевания тканей. У собак достаточно большое количество витамина D может вызвать почечную недостаточность в течение нескольких дней.

Так сколько же витамина D — это слишком много? Ответ: мы точно не знаем.

Организации, устанавливающие диетические требования для кормов для домашних животных — Американская ассоциация должностных лиц по контролю кормов (AAFCO), Национальный исследовательский совет (NRC) и Европейская федерация пищевой промышленности для домашних животных (FEDIAF) — все согласны с тем, что витамин D является незаменимым питательное вещество для собак. Но их определения допустимого потребления попадают в широкий диапазон. И никаких безопасных верхних пределов не определено.

Частично проблема заключается в том, что, хотя роль витамина D во многих аспектах здоровья человека продолжает привлекать все большее внимание, гораздо меньше исследований было проведено о том, как витамин D действует у собак.

Что мы знаем о витамине D и собаках

Витамин D вырабатывается растениями и кожей большинства млекопитающих в ответ на ультрафиолетовый свет. Форма, производимая растениями, называется D2; форма, производимая кожей, — D3. В отличие от людей, собаки почти не получают витамина D из-за воздействия солнечного света на кожу, поэтому почти весь витамин D должен поступать из их рациона.

Витамин D, содержащийся в пище вашей собаки, всасывается в кишечнике, а затем ферментами печени превращается в несколько иную молекулу.Эта молекула, наконец, метаболизируется в почках в активную форму витамина D, которая может быть использована организмом. Эта полезная форма витамина D, называемая кальцитриолом, на самом деле является гормоном и хранится в основном в жировой ткани.

Мы знаем, что собакам необходим витамин D для роста и сохранения крепких костей. Кроме того, этот витамин частично контролирует воспаление. Более новые исследования показали, что он также участвует в регулировании генов и поддержании здоровья клеток.

Сколько витамина D нужно собакам?

Такой широкий диапазон допустимых количеств витамина D в кормах для собак отражает тот факт, что еще не было проведено достаточных исследований того, сколько собак на самом деле нужно.

Различные коммерческие корма для собак могут содержать радикально разные количества витамина D, в зависимости от выбора каждого производителя в пределах допустимого диапазона, установленного AAFCO и аналогичными организациями.

В кормах для собак, которые недавно были отозваны из-за повышенного уровня витамина D — в некоторых случаях более чем в 70 раз превышающего запланированное, — ошибка в «витаминном премиксе», как сообщается, была источником проблемы.

Но даже если предварительно приготовленная смесь синтетических витаминов, добавляемая в корм для домашних животных, содержит заданное количество витамина D, его уровень в конечном продукте может быть слишком высоким, если производитель неправильно учел естественное содержание витамина D в другие ингредиенты.Кроме того, синтетические витамины не всегда ведут себя так же, как пищевые витамины. (Если на этикетке корма для домашних животных указано «витамин D» в качестве ингредиента, это синтетический витамин.)

‍

‍

Недостаток витамина D — тоже проблема

Большинство исследований этого витамина на собаках было сосредоточено на последствиях его дефицита. Но даже оценить уровень витамина D у собаки с помощью анализа крови проблематично, согласно недавнему отчету собачьих исследований по этому вопросу.

С одной стороны, исследователи не могут измерить, сколько этой последней пригодной формы витамина D (кальцитриола) есть у собаки; они могут измерить только промежуточную форму, вырабатываемую печенью. По оценкам последних исследований, 75% собак не получают достаточного количества этой предварительной формы, но значение этой статистики несколько неясно.

‍

У щенков, в рационе которых недостаточно витамина D, развиваются слабые, мягкие кости (состояние, известное как рахит).Низкий уровень витамина D у взрослых собак был связан с хроническим заболеванием почек, воспалительным заболеванием кишечника (ВЗК), гиперпаратиреозом, застойной сердечной недостаточностью и некоторыми видами рака.

Но исследователи не смогли показать, что большее количество витамина D снижает риск большинства этих заболеваний. Фактически, может случиться так, что некоторые заболевания, особенно рак, на самом деле вызывают дефицит витамина D , нарушая способность организма перерабатывать витамин в пригодную для использования форму.

Этот корм для собак напоминает

Девять брендов сухих кормов для собак были отозваны в конце 2018 года, когда было обнаружено, что они содержат слишком высокий уровень витамина D. В январе 2019 года Hill’s Pet Nutrition отозвала несколько разновидностей своих консервов для собак из-за той же проблемы. Отзыв The Hill был расширен в марте. Вы можете найти дополнительную информацию о конкретных брендах и продуктах, участвующих в этих отзывах, здесь.

Производители отозванного корма для собак впервые были предупреждены о проблеме от обеспокоенных родителей домашних животных, чьи собаки заболели.До сих пор неясно, сколько случаев болезней или смертей было вызвано изъятыми продуктами. Если вы подозреваете, что ваша собака заболела из-за избытка витамина D, вы можете найти дополнительную помощь, включая ссылки для сообщения о жалобе, на веб-сайте FDA.

‍

Сообщите нам, если у вас есть какие-либо вопросы или комментарии по этой статье. Если вам понравилась эта статья, поделитесь ею.

Токсикоз витамина D | Ветеринарные отделения штата Айова

Автор: Лена Р.

История

7-летняя стерилизованная самка лабрадора-ретривера по кличке Клен весом 62 фунта поступила за прием 20 гелевых капсул витамина D-3 неизвестной концентрации — 400 или 5000 МЕ на капсулу. Клена трижды рвало дома, причем некоторые из колпачков содержались внутри рвотных масс, и владельцы позвонили на горячую линию по отравлению домашних животных.

Презентация

При медицинском осмотре Клен выглядела здоровой, живот не ощущался при пальпации, а частота сердечных сокращений была в пределах нормы.В то время она не была вялой или депрессивной.

Вопрос

Клен потреблял достаточно добавок, чтобы вызвать клинические симптомы? Симптомы токсикоза витамина D можно увидеть при дозах всего 0,1 мг / кг, а летальная доза для зрелой собаки может составлять всего 2 мг / кг (4). При входе клен весил 28 кг. 1 МЕ = 0,025 мкг и 1 мкг = 0,001 мг (3).

Если гелевые капсулы были 400 МЕ: 400 МЕ x 0,025 = 10 мкг x 0,001 = 0,01 мг. Если она съела 20 гелевых капсул, общая доза, которую она выпила, была бы 0.2 мг. Для собаки весом 28 кг эта доза будет нетоксичной — 0,007 мг / кг.

Если гелевые капсулы были 5000 МЕ: 5000 МЕ x 0,025 = 125 мкг x 0,001 = 0,125 мг. Если она съела 20 гелевых капсул, общая доза составила бы 2,5 мг. Для собаки весом 28 кг эта доза будет нетоксичной — 0,08 мг / кг.

Однако из-за невозможности точно знать, что ела Клен, самым безопасным выбором было госпитализировать ее с предполагаемым токсикозом витамина D.

План лечения

• Госпитализировать на 72 часа с внутривенным введением физиологического раствора для мочеиспускания почек.
• гель UAA с сорбитолом.
• CBC, панель биохимического анализа крови, iStat для проверки свободного кальция и общий анализ мочи.
• Повторно проверяйте отсутствие кальция и фосфора в iStat каждые 12 часов.
• Повторно проверяйте общий анализ крови / хим. Каждые 24 часа, чтобы контролировать показатели почек.
• Лекарства для перорального применения: фуросемид для стимуляции выведения кальция почками (2) и фамотидин в качестве защитного средства для желудочно-кишечного тракта.
• Необязательно: добавление перорального преднизона (кортикостероида) для уменьшения реабсорбции кальция в костях и уменьшения абсорбции кальция в желудочно-кишечном тракте (3).

Результат

Мэйпл был госпитализирован на внутривенное вливание на 72 часа. Ее общий уровень кальция и фосфора оставался в пределах нормы на протяжении всего курса лечения, а показатели почек (АМК и креатинин) были в пределах нормы на момент выхода. Она была выписана с рекомендацией повторно проверить показатели почек еще через 48 часов, чтобы убедиться, что инцидент не повлечет за собой длительных последствий.

Обзор

Токсикоз витамина D — это потенциально опасное для жизни состояние, которое вызывает повышенную реабсорбцию кальция, что приводит к повреждению почек.Клинические признаки включают боль в животе, боль в почках при пальпации, депрессию, брадикардию (учащенное сердцебиение), рвоту и диарею (1). После выполнения анализа крови обнаруживаются гиперкальциемия, гиперфосфатемия, гипокалиемия и азотемия. Наиболее частой причиной токсичности витамина D у собак является прием внутрь родентицидов холекальциферола (4).

Артикул:

• Тилли, Лоуренс П., Фрэнсис В. К. Смит и Лоуренс П. Тилли. «Токсичность витамина D». Пятиминутная ветеринарная консультация Блэквелла: собаки и кошки.Эймс, ИА: Блэквелл, 2007. 1317-319. Распечатать.
• Пламб, Дональд К. «Фуросемид». Справочник по ветеринарным препаратам Plumb. Стокгольм, Висконсин: PharmaVet, 2011. 454-57. Распечатать.
• «Холекальциферол: отравление родентицидами». Ветеринарное руководство. Мерек, октябрь 2014 г., Web. 02 августа 2016 г.
• Петерсон, Майкл Э. и Патрисия А. Талкотт. «Глава 38: Холекальциферол». Токсикология мелких животных. Сент-Луис, Миссури: Saunders / Elsevier, 2006. 489-98. Распечатать.

Просмотреть всех ученых

Пероральный прием витамина D в пятикратной рекомендованной дозе незначительно влияет на концентрацию 25-гидроксивитамина D в сыворотке у собак

Abstract

Об оптимальном статусе витамина D у взрослых собак известно немного.На сегодняшний день не сообщалось об исследованиях добавок витамина D для улучшения статуса витамина D у взрослых собак. Цели этого исследования заключались в выявлении собак с низким статусом витамина D и оценке эффективности пероральной дозы холекальциферола (D ₃ ) для повышения статуса витамина D. Для этого были оценены 46 собак, находящихся в частной собственности. Из собак тридцать три (или 71,7%) имели концентрацию 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке менее 100 нг / мл, минимум, ранее предполагавшийся для достаточности витамина D у собак.Впоследствии тринадцать собак были включены в испытание добавок. Собаки получали либо добавку D ₃ ( n 7; 2 · 3 мкг / кг ^{0 · 75} ) или плацебо с оливковым маслом ( n 6) ежедневно во время еды. Концентрации 25 (OH) D в сыворотке определяли на 1, 3 и 6 неделях и в конце испытания. Только в конце испытания (9–10 недели) 25 (OH) D было значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших добавку против плацебо. Концентрации 24R, 25-дигидроксихолекальциферола в сыворотке крови, определенные в конце испытания, составляли около 40% от концентрации 25 (OH) D ₃ и существенно не различались между группами.Концентрации паратиреоидного гормона, ионизированного Ca, P и креатинина, измеренные в исходных и конечных образцах сыворотки, показали, что добавка не вызвала токсичности. Мы пришли к выводу, что добавление витамина D ₃ в дозировке, близкой к рекомендованной Национальным исследовательским советом безопасному верхнему пределу, не было эффективным для быстрого повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у здоровых взрослых собак. Необходима дальнейшая работа по оценке метаболизма перорально вводимого D ₃ у собак, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке.

Ключевые слова: холекальциферол, 25-гидроксиэргокальциферол, 24R, 25-дигидроксихолекальциферол, паратиреоидный гормон, ионизированный кальций

Сокращения: 1,25 (OH) ₂ D _{3- 3 ; 24R, 25 (OH) 2 D 3 , 24R, 25-дигидроксивитамин D 3 ; 25 (OH) D, 25-гидроксивитамин D; 25 (OH) D 2 , 25-гидроксиэргокальциферол; 25 (OH) D 3 ,25-гидроксихолекальциферол; BW — масса тела; CLIA, иммунохемилюминесцентный анализ; iCa, ионизированный Ca; NRC, Национальный исследовательский совет; ПТГ, паратиреоидный гормон}

Витамин D широко изучается в медицине человека с момента открытия его важности для развития и поддержания нормального скелета в начале 1900-х годов.В настоящее время известно, что благодаря взаимодействию рецепторов витамина D в более чем сорока тканях организма действие 1,25-дигидроксивитамина D ₃ (1,25 (OH) ₂ D ₃ ) выходит за рамки гомеостаза Ca и профилактика рахита и остеомаляции с вовлечением почти всех систем организма ⁽, 1 ⁾ .

Принято считать, что лучшим индикатором статуса витамина D является сывороточный 25-гидроксивитамин D (25 (OH) D), поскольку это самый распространенный циркулирующий метаболит витамина D, и его концентрация определяется потреблением витамина D ⁽, 2 ⁾ .Во многих отчетах определен достаточный статус витамина D у людей путем оценки хорошо установленной обратной зависимости между сывороточными концентрациями 25 (OH) D и паратироидного гормона (ПТГ) ⁽, 3 ^— 6 ⁾ . Концентрация 25 (OH) D в точке перегиба ПТГ, за пределами которой наблюдается небольшое дальнейшее снижение ПТГ, интерпретируется как показатель оптимального гомеостаза Са и маркер достаточности витамина D у людей. Однако это привело к некоторым противоречиям в определении достаточного статуса витамина D у людей, поскольку оценки концентраций 25 (OH) D, необходимых для подавления концентраций ПТГ, варьировались ⁽, 7 ⁾ .

Недавно Институт медицины рекомендовал определять дефицит витамина D у людей как концентрацию 25 (OH) D менее 20 нг / мл, а недостаточность — как 21–29 нг / мл ⁽, 8 ⁾ . Хотя концентрации, которые определены как недостаточные, являются адекватными для профилактики заболеваний костей, появляется все больше доказательств того, что концентрации более 30 нг / мл и ближе к 40 нг / мл желательны для оптимального здоровья и предотвращения хронических заболеваний у людей. ⁽, 9 ⁾ .Тем не менее, по оценкам, 20–100% пожилых мужчин и женщин в США, Канаде и Европе испытывают дефицит витамина D, и текущие рекомендованные нормы витамина D вряд ли могут обеспечить достаточный уровень витамина D для большинства людей ⁽, 8 ^, 9 ⁾ .

Несмотря на обширные исследования витамина D и здоровья людей, до недавнего времени не проводилось исследований по определению достаточности витамина D у взрослых собак. Сравнивая взаимосвязь между концентрациями 25 (OH) D и интактным ПТГ (iPTH), аналогично исследованиям на людях, исследователи обнаружили, что медиана и дисперсия в наблюдениях iPTH среди собак снизились до плато, когда концентрации 25 (OH) D были на уровне 100 нг / г. мл ⁽, 10 ⁾ .Столь же значимое снижение вариабельности средних сывороточных концентраций C-реактивного белка у собак, маркера хронического воспаления, наблюдалось при концентрациях 25 (OH) D 100–120 нг / мл. Кроме того, это исследование показало снижение относительного риска развития рака по мере увеличения концентрации 25 (OH) D. Хотя мы считаем, что эти результаты следует воспроизвести, эта информация предоставляет новые доказательства, на которых можно основывать оценку достаточности витамина D у взрослых собак для профилактики хронических заболеваний.Однако сообщения о концентрациях 25 (OH) D в сыворотке крови у практически здоровых собак сильно различаются ⁽, 10 ^— 13 ⁾ , причем многие из них могут считаться имеющими недостаточный статус витамина D.

В отличие от людей и некоторых других видов, собаки не могут эндогенно синтезировать витамин D ₃ в своей коже в ответ на УФ-свет ⁽, 14 ⁾ . Следовательно, собаки зависят от своего рациона для обеспечения своих потребностей в витамине D, в первую очередь за счет приема витамина D ₃ (холекальциферол), но также витамина D ₂ (эргокальциферол).Потребность в витамине D в рационе взрослых собак четко не установлена. Текущее рекомендуемое пособие Национальным исследовательским советом (NRC) основано на результатах исследований, определяющих пищевые концентрации витамина D, которые предотвращают аномалии скелета у щенков. В отсутствие долгосрочных исследований у взрослых, беременных и кормящих собак рекомендации по питанию щенков экстраполируются на все стадии жизни ⁽, 15 ⁾ , что может не отражать потребление, необходимое для достижения определенного результата для здоровья. .

В ветеринарии многие исследователи сообщили о связи между низкими концентрациями 25 (OH) D в сыворотке крови и опухолью тучных клеток собак ⁽, 16 ⁾ , хроническим заболеванием почек ⁽, 17 ⁾ , застойной сердечной недостаточностью ⁽, 18 ⁾ , воспалительное заболевание кишечника ⁽, 19 ⁾ и рак ⁽, 10 ⁾ . Хотя причинно-следственная связь не установлена, эти исследования служат основанием для того, что добавление витамина D может улучшить состояние здоровья, снизить риск заболевания и может использоваться в качестве дополнительной терапии при многих заболеваниях собак.На сегодняшний день нет опубликованных исследований об эффективности перорального приема витамина D для повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у собак. Таким образом, целью нашего исследования было выявление собак с низким статусом витамина D, как было определено ранее ⁽, 10 ⁾ , и оценка реакции на добавление витамина D ₃ . Наша гипотеза заключалась в том, что добавление витамина D ₃ в суточной дозе, в пять раз превышающей рекомендованную NRC, но в пределах безопасного верхнего предела NRC, эффективно и действенно повысит статус витамина D, не вызывая биохимических нарушений, совместимых с витамином D. токсичность при введении собакам с низкими концентрациями 25 (OH) D.

Материалы и методы

Животные: исследование статуса витамина D

По запросу в нашем университетском кампусе, мы рассмотрим 46 частных взрослых собак в возрасте 1 · 25–12 · 0 лет (медиана 5 · 0 лет) были вызваны для оценки статуса витамина D. Были представлены различные породы с половым распределением: тринадцать кастрированных самцов (MN), тридцать две стерилизованные самки (FS) и одна интактная самка. Масса тела (BW) варьировалась от 5,3 до 49,0 кг (в среднем 22,5 кг) с оценкой состояния тела 4–8 / 9 (в среднем 5/9).Все собаки были отмечены их владельцами как клинически здоровые на момент оценки. Исключались собаки с массой тела менее 2 · 2 кг, клинически больные собаки, собаки, которые в настоящее время принимают витаминные добавки или лекарства, которые могут изменять гомеостаз Ca, P или витамина D, или соблюдают явно несбалансированное питание. Владельцы заполнили анкету относительно диеты, окружающей среды, принимаемых лекарств и состояния здоровья. Владельцы подписали форму информированного согласия перед участием, которая включала возможность участия в последующем испытании добавок витамина D, если у их собаки был обнаружен низкий статус витамина D.Форма согласия и протокол использования животных были рассмотрены и одобрены комитетом по уходу и использованию животных нашего учреждения.

Дизайн исследования

баллов BW и состояния тела и мышц. Приблизительно 5 мл крови было взято из яремной или головной вены после отказа от еды на ночь. Экстрагированную сыворотку хранили при -20 ° C для последующего анализа концентрации 25 (OH) D.

Животные: испытание добавок витамина D

Владельцы тринадцати собак (четыре MN, девять FS), у которых в ходе исследования был обнаружен низкий статус витамина D, приняли участие в клиническом исследовании для оценки эффективности перорального приема витамина D ₃ добавка для улучшения статуса витамина D.Сигналы и другая информация для групп приведены в. Большинство собак содержалось в основном в помещении, одна собака — как в помещении, так и на улице, и одна — только на улице. Полная история рациона была доступна для двенадцати из тринадцати собак, из которых кормили одиннадцать различных коммерчески доступных сухих рационов. Рационы были помечены, чтобы указывать на то, что они прошли тестирование кормов для животных ( n 8) или состав ( n 3) в соответствии с профилями питательных веществ кормов для собак Американской ассоциации специалистов по контролю кормов (AAFCO) для содержания взрослых особей ( n 9) или все стадии жизни ( n 2).Содержание витамина D в этих диетах было получено путем обращения в компанию-производителя для типичного анализа конечного продукта, который все компании предоставили на основе энергии и «как есть». Общее суточное потребление витамина D было рассчитано для двенадцати собак с учетом количества витамина D, присутствующего в рационе, как указано производителями, истории приема пищи от владельцев и метаболического BW собаки. Оставшуюся собаку кормили ad libitum , и конкретный состав рациона время от времени менялся в зависимости от владельца, поэтому получение диетического витамина D от производителя или оценка потребления витамина D с пищей было невозможно.Одна диета, которую скармливали двум собакам, принадлежащим к одному дому, не удовлетворяла минимальным требованиям AAFCO витамина D с точки зрения энергии. Основываясь на информации о потреблении корма, предоставленной владельцем, эти собаки не потребляли достаточного количества корма для удовлетворения нормального потребления витамина D NRC на основе метаболической массы тела (0,36 мкг / кг ^0,75 ) ().

Таблица 1.

Данные о сигналах и состоянии тела для собак в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Таблица 2.

Дизайн исследования

Непосредственно перед началом исследования проба, кровь из яремной или головной кишки снова была получена после воздержания от еды на ночь.Полный анализ крови с ручным дифференцированием и панель клинического химического анализа сыворотки были получены для скрининга каждой собаки на предмет основного заболевания и определения исходных значений. Сыворотку хранили при -20 или -80 ° C в пластиковых пробирках для более поздних определений ПТГ и ионизированного Са (iCa). Собаки были отнесены к контрольной ( n, 6) или экспериментальной группе ( n 7) на основании необходимости уравновешивания размера групп, а также возраста, пола и BW. Собаки, принадлежащие к одному домохозяйству, были отнесены к одной группе.Владельцы не знали, к какой группе принадлежала их собака.

Собаки экспериментальной группы получали добавку витамина D ₃ в оливковом масле. Добавку готовили путем растворения 29 мг витамина D ₃ (холекальциферол; Sigma-Aldrich) в 1 · 26 мл этанола и смешивания 1 мл раствора с 900 г очищенного оливкового масла (Great Value; Wal-Mart Stores). для получения концентрации 23 мг / л или 23 мкг витамина D ₃ / мл. Содержимое одной капсулы витамина E (добавка витамина E 1000 МЕ, Spring Valley; Wal-Mart Stores) было добавлено для предотвращения окисления полиненасыщенных жиров (ПНЖК) в масле во время хранения (1 мг дл-α-токоферола / 1 г ПНЖК).Контрольная группа получала плацебо того же оливкового масла, приготовленного таким же образом с витамином Е. После приготовления добавку и контрольный масляный запас хранили в темном шкафу при комнатной температуре. Лечебные и контрольные собаки получали дозу на основе метаболической массы тела (0,1 мл / кг массы тела ^{± 75} в день). В этой дозировке обработанные собаки получали примерно 2,3 мкг витамина D ₃ / кг BW ^0,75 в день, количество, которое в 5,1 раза превышает рекомендуемую дозу, но не превышает безопасный верхний предел, рекомендованный NRC для содержания взрослых собак (2,6 мкг / кг BW ^0,75 ) ⁽, 20 ⁾ .Владельцы применяли суточную дозу к пище и были проинструктированы не изменять диету, окружающую среду и график упражнений во время испытания.

Собаки были повторно обследованы после начала лечения или приема плацебо на 1, 3, 6 неделях и в конце испытания, 9–10 неделях. При каждой оценке собирали венозную кровь после прекращения приема пищи в течение ночи и собирали сыворотку для анализа на общий 25 (OH) D. В конце испытания была получена дополнительная сыворотка для анализа на: 24R, 25-дигидроксивитамин D ₃ (24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ), 25-гидроксихолекальциферол (25 (OH) D ₃ ) и 25-гидроксиэргокальциферол (25 (OH) D ₂ ), ПТГ, iCa, P и креатинин.Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки для собаки перед выдачей и по завершении испытания. Концентрация витамина D ₃ была проанализирована в запасе остаточного масла для обработки и обработанной добавке, возвращенной владельцами.

Лабораторные анализы

Полный анализ крови (Sysmex xT-2000i; Sysmex America, Inc.) и клинический химический анализ сыворотки (Beckman AU 400e; Beckman Coulter, Inc.) были выполнены в Ветеринарно-медицинской диагностической лаборатории Университета Миссури ( Колумбия, Миссури, США).Общий 25 (OH) D в сыворотке оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с использованием утвержденного анализа 25 (OH) D (LIAISON; DiaSorin, Inc.). Анализ представляет собой прямой конкурентный иммуноферментный анализ хемилюминесценции (CLIA) для количественного определения 25 (OH) D в сыворотке крови. Анализ был одобрен для использования на собаках с коэффициентом вариации внутри и между анализами 4 · 0 и 3 · 4%, соответственно, ⁽, 10 ⁾ .

Определены концентрации метаболитов витамина D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ , 25 (OH) D ₂ и 25 (OH) D ₃ в аликвотах 0,5 мл размороженная сыворотка с использованием модификации метода ВЭЖХ, о котором ранее сообщалось ⁽, 21 ⁾ .Для этого образцы сыворотки (0,5 мл) инкубировали в течение ночи при температуре около 4 ° C с внутренним стандартом (2000 дезинтеграций в минуту 25- [26,27- ³ H] гидроксивитамина D ₃ ) перед их экстракцией. . AUC пиков ВЭЖХ 25 (OH) D ₃ и 25 (OH) D ₂ (Cerilliant) линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта во всем диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. Подвижную фазу собирали в течение 2-минутных периодов, совпадающих со временем элюирования стандартов, 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ (Santa Cruz Biotechnology).Фракцию 25 (OH) D ₃ сушили центрифужным испарением, восстанавливали в 6 мл сцинтилляционной смеси и подсчитывали по распаду ³ H (2000 CA Tri-Carb; Packard Instrument). К фракции 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ВЭЖХ добавляли внутренний стандарт (10 нг 25 (OH) D ₃ ), сушили центробежным испарением и восстанавливали в 130 мкл 20:80 этанола– гексаны, подвижная фаза второго метода ВЭЖХ для количественного определения 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .

Для второго метода ВЭЖХ 100 мкл восстановителя вводили в подвижную фазу, протекающую со скоростью 1,0 мл / мин на колонке (Capcell Pak Nh3, UG80, 5 мкм, 4,6 × 250 мм; Shiseido) при температуре окружающей среды. температура (21–23 ° С). AUC УФ-пиков (265 нм) стандартов 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ и 25 (OH) D ₃ линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта в диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. .

Сывороточный ПТГ оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с помощью прямого двухузлового CLIA типа «сэндвич».Ранее сообщалось о чувствительности, специфичности, CV внутри и между анализами ⁽, 10 ⁾ . Анализы iCa были выполнены в Диагностическом центре популяции и здоровья животных при Университете штата Мичиган, Лансинг, штат Мичиган, США (Nova 8 Plus; Nova Biomedical).

Анализ витамина D

Содержание витамина D ₃ в добавке с оливковым маслом определяли модификацией ранее описанного метода ⁽, 22 ⁾ .Для каждого определения 1 мл масла экстрагировали 9 мл метанола, к которому добавляли 25 мкг внутреннего стандарта (эргокальциферол; Supelco), растворенного в метаноле. Часть экстракта (10 мкл) вводили в колонку для ВЭЖХ (2 · 0 × 250 мм ² , Ultrasphere ODS 5 мкм Beckman Instruments), уравновешенную подвижной фазой (82: 13: 5, ацетонитрил-метанол-вода, по об.) с расходом 0,3 мл / мин. Концентрации витамина D ₃ и внутреннего стандарта определяли по оптической плотности AUC, зарегистрированной при 265 нм.CV концентраций витамина D ₃ , определенных в добавке, содержащей витамин D ₃ , при 25 мкг / мл, составлял 2,3%. Все анализы проводились в одной партии.

25-гидроксивитамин D

Для определения оптимальных условий хранения 25-гидроксивитамина D ₃ его стабильность оценивали в течение 15 недель замораживания и 14 дней охлаждения. Для этих анализов использовали объединенную сыворотку бигля (25 мл; Innovative Research), к которой был добавлен 25 (OH) D ₃ (2,5 мкг в 0,25 мл метанола).Аликвоты 0,5 мл сыворотки хранили в холодильнике (4 ° C) и в морозильных камерах при -20 и -80 ° C. В дни 0, 2, 4, 7, 10 и 14 хранения в холодильнике и на 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недели хранения в морозильнике определяли концентрацию 25 (OH) D ₃ в дублировать аликвоты методом, описанным для анализа сыворотки 25 (OH) D ₃ . Для этого испытания 25 (OH) D ₂ (50 нг в 10 мкл метанола) использовали в качестве внутреннего стандарта вместо метки ³ H.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием проприетарного программного обеспечения (Excel 2013, Microsoft; SAS® 9.3, SAS Institute, Inc.). Переменные наблюдения считались нормально распределенными, если вычисленное среднее и медиана отличались менее чем на 10%, статистика эксцесса и перекоса составляла от 1 до –1, а графики наблюдений стебель – лист показали несколько выбросов. Было обнаружено, что все переменные наблюдения имеют нормальное распределение, за исключением ПТГ, iCa, потребления витамина D и изменения концентрации 25 (OH) D до и после сыворотки. После преобразования журнала наблюдения PTH были нормально распределены. Для нормально распределенных наблюдений значимость различий в переменных наблюдений внутри и между контрольной и экспериментальной группами определялась с помощью парных и двухвыборочных тестов t , соответственно.Для ненормально распределенных наблюдений центральная тенденция и вариация были выражены в виде медианы и диапазона, а различия в переменных внутри и между группами были проверены на значимость с помощью знакового ранга и двухвыборочного теста Вилкоксона, соответственно. Значимость переменных корреляций проверялась с помощью корреляции Пирсона. P значения ≤ 0,05 считались значимыми.

Среднее значение и стандартное отклонение были рассчитаны для концентраций 25 (OH) D, наблюдаемых у тринадцати участвующих собак до включения в испытание добавок.Используя эти значения и размеры групп из шести и семи собак для контрольной и экспериментальной групп, соответственно, было подсчитано, что при степени β = 0,8 средняя разница в концентрациях 25 (OH) D между группами должна была бы быть равной. быть больше 25% для достижения значимости при α = 0,05.

Результаты

Обзор витамина D

Концентрация общего 25 (OH) D в сыворотке варьировала от 34,7 нг / мл до значений, превышающих линейный диапазон анализа общего 25 (OH) D> 150 нг / мл. Мы не запрашивали разведение и повторный анализ нескольких образцов сыворотки ( n 4) с концентрациями> 150 нг / мл ().Тридцать три собаки (71,7%) имели значения 25 (OH) D ниже минимальной концентрации, о которой сообщалось ранее, что указывает на достаточный статус витамина D в 100 нг / мл ⁽, 10 ⁾ . Средние значения 25 (OH) D для самок и самцов составили 82,7 (стандартное отклонение 26,0) и 83,7 (стандартное отклонение 21,5) нг / мл, соответственно, за исключением собак с концентрациями> 150 нг / мл. Концентрации 25 (OH) D существенно не различались между двумя полами.

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке у взрослых собак ( n 33) и самцов ( n 13) взрослых собак при исследовании статуса витамина D.∆ — Одна целая самка; —-, ранее сообщалось о достаточном статусе 25 (OH) D (100 нг / мл).

Испытание добавок витамина D

Средние общие концентрации 25 (OH) D для контрольной группы составляли 66 · 2 (стандартное отклонение 8 · 8) и 71 · 3 (стандартное отклонение 8 · 4) нг / мл в группе лечения до вступление в суд. Существенных различий не было обнаружено ни в контрольной, ни в экспериментальной группе для концентраций 25 (OH) D до приема добавок и на 1, 3, 6 и 9-10 неделях. Кроме того, не было обнаружено значительных различий между контрольной и экспериментальной группами до приема витамина D ₃ и через 1, 3 и 6 недель.Концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови были значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших лечение, по сравнению с контрольной группой на 9-10 неделе (). Однако анализ изменения концентраций 25 (OH) D в сыворотке от начала до конца испытания между двумя группами не достиг значимости. Начальная и конечная концентрации 25 (OH) D в сыворотке достоверно не коррелировали с исходными и конечными концентрациями iCa, PTH или P в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы. Хотя расчетное потребление витамина D с пищей в контрольной группе было значительно больше ( P = 0,03), чем в группе лечения, начальные концентрации 25 (OH) D в сыворотке не коррелировали в значительной степени с начальными оценками потребления витамина D ().

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке крови для контрольной (□; n 6) и лечебной (■; n 7) групп до начала испытания витамина D ₃ ( до испытания), а также на 1, 3, 6 и 9–10 неделях после начала приема добавок. Значения представляют собой средние значения со стандартными ошибками, представленными вертикальными полосами. * Среднее значение значительно отличалось от контрольной группы ( P = 0,05; двухвыборочный тест t ).

Лабораторные анализы

За некоторыми исключениями, результаты полного анализа крови и химического анализа сыворотки у собак были в пределах клинических лабораторных эталонных диапазонов (дополнительная таблица S1).Концентрации сывороточного ПТГ, iCa, P и креатинина существенно не изменились от начала до конца испытания ни в одной из групп. Не было обнаружено значительных различий для этих переменных между контрольной и экспериментальной группами до и по завершении исследования, за исключением iCa, где разница между группами до начала исследования была статистически значимой (). Начальная и конечная концентрации iCa достоверно не коррелировали с начальными и конечными концентрациями ПТГ в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы.

Таблица 3.

Результаты биохимических анализов сыворотки для контрольной ( n 6) и лечебной ( n 7) групп до начала и после завершения испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Метаболиты витамина D

Экстракты образцов сыворотки, используемые для количественного определения метаболитов витамина D имели четко идентифицируемые хроматографические пики при временах удерживания стандартов для 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .Хроматографический пик, совпадающий со временем удерживания стандарта 25 (OH) D ₂ , не был обнаружен ни в одном экстракте. Расчетные концентрации для сыворотки 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ составляли около 40% от рассчитанных для 25 (OH) D ₃ (). Они существенно не коррелировали с концентрациями 25 (OH) D ₃ . Средняя концентрация 25 (OH) D ₃ у собак экспериментальной группы была численно выше, чем у собак контрольной группы, но эта разница не достигла значимости.Кроме того, не было обнаружено значительной разницы между концентрациями 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в двух группах.

Таблица 4.

Концентрации метаболитов витамина D в сыворотке крови в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах, измеренные с помощью ВЭЖХ по завершении испытания добавок витамина D

(Средние значения и стандарт отклонения)

Анализ витамина D

Концентрация витамина D ₃ в исходной добавке, определенная количественно по завершении испытания, составила 20,7 мкг / мл, что составляет около 90% от первоначально запланированного включения.Каждая лечебная добавка, содержащая витамин D ₃ , выданная владельцам, была определена количественно по завершении испытания. Концентрации витамина D ₃ варьировались от 19,1 до 22,4 мкг / мл (в среднем 19,7 мкг / мл). Средняя измеренная концентрация (19,9 мкг / мл) представляла потерю 13% первоначального целевого включения (23 мкг / мл).

25-Hydroyxvitamin D

Концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранившихся при 4 ° C в течение 2, 4, 7, 10 и 14 дней, существенно не отличались от концентраций, определенных на день 0.Аналогичным образом, концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранящихся при -20 и -80 ° C в течение 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недель, существенно не отличались от концентраций, определенных в день 0. .

Обсуждение

Наша цель по оценке эффективности перорального приема витамина D для улучшения статуса витамина D у практически здоровых взрослых собак основана на предыдущих выводах о том, что собаки с хроническими заболеваниями имеют более низкие концентрации витамина D ⁽, 10 ^, 16 ^— 19 ⁾ .Подобно исследованиям в медицине, исследователи недавнего исследования определили достаточность витамина D в большой группе взрослых собак путем оценки биомаркеров, на которые влияет статус витамина D ⁽, 10 ⁾ . Было обнаружено, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке собак при очевидном асимптотическом минимуме сывороточной концентрации ПТГ составляет 100 нг / мл. Насколько нам известно, это первый опубликованный отчет, в котором определяется достаточный уровень витамина D у взрослой собаки в поддерживающем состоянии.Хотя мы считаем, что необходимо провести много исследований, чтобы подтвердить это определение достаточности витамина D, мы также считаем, что исследования, подобные нашему, которые оценивают способы достижения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови 100 нг / мл, являются оправданными.

Наш вывод о том, что большинство (71,7%) практически здоровых собак, которых мы оценивали, имели концентрацию 25 (OH) D в сыворотке ниже 100 нг / мл (), согласуется с результатами недавних исследований ⁽, 10 ^, 13 ⁾ . Причина этого открытия у собак неизвестна, но, вероятно, этому способствуют многие факторы, включая различия в включении витамина D в рационы и индивидуальные различия в потреблении, абсорбции и метаболизме витамина D.К сожалению, количество витамина D в рационе, необходимое для достижения определенного результата для здоровья, может быть трудно определить. Одна из причин заключается в том, что диетические анализы витамина D могут не учитывать всю активность витамина D. Например, жировая ткань и печень, которые являются обычными ингредиентами кормов для собак, могут содержать значительные количества 25 (OH) D по сравнению с витамином D ⁽, 23 ⁾ . Поскольку анализируемое содержание витамина D в корме для собак может быть предоставлено производителем по запросу; О содержании 25 (OH) D в кормах для собак обычно не сообщается, и мы подозреваем, что обычно не определяется.В настоящее время авторы исследуют, имеет ли пероральный 25 (OH) D большую эффективность в повышении статуса витамина D у собак. Было показано, что у людей проглоченный 25 (OH) D во много раз более эффективен, чем витамин D, в повышении сывороточного 25 (OH) D ⁽, 24 ⁾ .

Также проблематичными для определения достаточности включения витамина D в рацион для всех собак являются факторы, влияющие на сывороточные концентрации 25 (OH) D у собак, такие как пол (самцы> самки), репродуктивный статус (интактные> кастрированные) и порода ⁽) , 13 ⁾ .Эффект репродуктивного статуса не мог быть подтвержден в текущей исследуемой когорте, учитывая, что все собаки, кроме одной, были кастрированы. Однако это может быть одним из факторов, способствующих низкому статусу витамина D у подавляющего большинства собак, оцениваемых в этом исследовании.

Хотя считается, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке крови указывает на статус витамина D у собак, следует отметить, что методы определения концентрации 25 (OH) D не стандартизированы, что может усложнить интерпретацию результатов ⁽ , 25 ^— 27 ⁾ .В нашем исследовании метод CLIA использовался для измерения общих концентраций 25 (OH) D, в то время как опубликованный метод ВЭЖХ ⁽, 21 ⁾ использовался для количественной оценки метаболитов витамина D, недоступных с помощью иммуноанализа. Мы обнаружили, что концентрации 25 (OH) D в сыворотке, определенные с помощью ВЭЖХ, по сравнению с концентрациями, определенными методом CLIA, используемым коммерческой лабораторией, имеют положительную корреляцию, но постоянно ниже (данные не показаны). Это методологическое различие было аналогично тому, о котором сообщили Lensmeyer и др. . ⁽, 21 ⁾ , исследователи, от которых мы адаптировали нашу методологию ВЭЖХ. Хроматографические методы, такие как HPLC и LC / MS, по сравнению с иммунологическими методами, такими как CLIA, рекламируются как более точные ⁽, 26 ⁾ .

Наиболее значимым результатом нашего исследования была лишь небольшая разница (12%) в статусе витамина D, когда собакам давали пероральную дозу витамина D, которую мы считали существенной (). В то время как значительная разница была обнаружена в концентрациях 25 (OH) D в сыворотке между контрольной и экспериментальной группами на 9-10 неделе, концентрации 25 (OH) D в сыворотке ни у одной собаки в группе лечения увеличились до сообщенных достаточных концентраций витамина D 100. нг / мл.Таким образом, наши результаты ставят под сомнение актуальность нашей добавки с витамином D ₃ для достижения конкретных результатов в отношении здоровья взрослых собак. Причина неэффективности наших добавок витамина D не была очевидна; однако были исследованы несколько возможностей объяснения результатов, которые далее обсуждаются здесь.

Для контроля переменных, которые, как сообщалось, влияют на изменения сывороточных концентраций 25 (OH) D у людей ⁽, 28 ^, 29 ⁾ , таких как возраст, пол и BW, контрольная и экспериментальная группы были сбалансированный.В среднем это не страдали ожирением собаки, и группы имели схожие состояния тела, поэтому избыток жира в организме и, следовательно, накопление витамина D ₃ в жировой ткани, вероятно, не объясняли бы слабую реакцию на добавку витамина D у наших испытуемых.

Схема лечения, использованная в этом исследовании добавок, соответствовала графику опубликованного исследования зависимости реакции от дозы на людях, которое показало почти асимптотические концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови после примерно 10 недель ежедневного перорального приема витамина D ₃ , независимо от дозы ⁽, 30 ⁾ .В этой работе на здоровых людях наибольшее повышение концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови по сравнению с исходным уровнем произошло в течение первых 3 недель приема добавок. Хотя неизвестно, реагируют ли собаки на добавки так, как это делают люди, ожидалось, что дизайн нашего исследования позволит нам зафиксировать раннее повышение 25 (OH) D в ответ на добавки. После обнаружения слабого ответа на концентрации 25 (OH) D в нашей группе лечения, испытание было завершено через 10 недель, учитывая, что у нас было маловероятно получить дальнейшие значимые результаты при сохранении этой дозы между двумя группами в этом испытании.

Чтобы оценить практические способы добавления витамина D собакам, был выбран пероральный и добровольный путь введения в пользу внутримышечного или внутривенного пути. Как жирорастворимый витамин D требует наличия жира в рационе для адекватного усвоения животным. Разумно предположить, что наличие витамина D в масляном носителе, который обычно используется в добавках витамина D для человека и вводится с едой, будет усваиваться здоровой собакой. Поскольку исследования дозировки витамина D у взрослых собак не проводились, особенно с целью улучшения статуса витамина D, выбранная дозировка добавок витамина D держалась чуть ниже рекомендованного NRC безопасного верхнего предела.Насколько нам известно, минимальная токсичная пероральная доза витамина D для взрослых собак не сообщалась, поэтому рекомендации NRC были учтены. Токсичность витамина D в рационе приводила к клиническим признакам и биохимическим нарушениям у двух взрослых собак, когда случайное избыточное потребление было примерно в 29 раз выше безопасного верхнего предела ⁽, 12 ⁾ . Исследование на щенках, получавших пищу с концентрацией, примерно в семнадцать раз превышающей безопасный верхний предел, также не привело к клиническим признакам токсичности витамина D, но серьезно нарушило эндохондральную оссификацию ⁽, 31 ⁾ .Следовательно, введенная доза витамина D ₃ , хотя и не является несущественной, не должна была вызвать токсичность.

Считается, что отсутствие добавок витамина D собаками и снижение дозировки добавок не повлияли на наши результаты. Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки перед выдачей и в конце испытания, как указание на то, что добавка давалась в адекватных количествах. Владельцы не сообщали о проблемах, связанных с недостаточным потреблением собаками, когда добавка в масле применялась в корме.Кроме того, удержание витамина D ₃ в добавках, выдаваемых владельцам, по результатам измерения по завершении испытания, все еще было близко к безопасному верхнему пределу для витамина D в соответствии с NRC.

Сообщается, что концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак выше, чем у людей ⁽, 32 ⁾ и других домашних животных ⁽, 33 ⁾ . Исследование возможного метаболического превращения 25 (OH) D у собак в 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ было проведено по завершении испытания добавок.Как основной метаболит 25 (OH) D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ продуцируется у собак 24-гидроксилазой в почках и кишечнике ⁽, 34 ⁾ . Установлено, что концентрация 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в сыворотке положительно коррелирует с концентрацией 25 (OH) D в сыворотке ⁽, 31 ^, 35 ⁾ . Эта корреляция была документально подтверждена в исследовании щенков, в котором сообщалось, что сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ были значительно выше в экспериментальной группе, потреблявшей в восемь раз больше диетического витамина D, чем в контрольной группе ⁽, 35 ⁾ .Эта разница в концентрациях 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ была обнаружена через 6 недель приема добавок, тогда как концентрации 25 (OH) D не различались между группами во время испытания. В настоящем исследовании сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак экспериментальной группы существенно не отличались от таковых у собак контрольной группы (). Следовательно, разумно сделать вывод, что повышенная метаболическая потеря 25 (OH) D до 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ не объясняет слабый ответ, который произошел в нашей группе лечения на добавление витамина D.

Правдоподобным объяснением слабой реакции сыворотки 25 (OH) D на нашу добавку витамина D может быть низкая биодоступность добавки. Необходимы исследования факторов, влияющих на всасывание витамина D собаками, распределение и метаболизм абсорбированного витамина D. Сообщения о влиянии добавок-носителей на биодоступность витамина D при пероральном приеме немногочисленны ⁽, 36 ⁾ . Насколько нам известно, сравнения биодоступности витамина D между добавками и включением в рацион для собак отсутствуют.Витамин D, введенный в воротную кровь собак, эффективно удаляется печенью ⁽, 37 ⁾ . Следовательно, слабый ответ сывороточного 25 (OH) D на пероральный прием витамина D у собак может отражать внепеченочное поглощение витамина D, например, жировой тканью, и / или измененное 25-гидроксилирование витамина D печенью. Также сообщается, что в печени собак концентрации 25 (OH) D такие же высокие, как и концентрации витамина D ⁽, 38, ⁾ , а скорость 25-гидроксилирования витамина D может быть экспериментально изменена ⁽). , 39 ⁾ .

Ограничением настоящего исследования является небольшой размер выборки. Хотя дизайн нашего исследования был достаточно убедительным, чтобы показать, что к концу испытания (9-10 недели) собаки, получавшие добавку витамина D ₃ , имели более высокие концентрации 25 (OH) D по сравнению с контрольными собаками, ни одна собака в группе лечения достигла заявленной концентрации 25 (OH) D, указывающей на достаточность. Кроме того, обратная зависимость между концентрациями ПТГ и 25 (OH) D в сыворотке, которая ранее была обнаружена у собак, не была очевидна в настоящем исследовании.Вероятно, это было результатом большой межиндивидуальной дисперсии ПТГ с любой данной концентрацией 25 (OH) D в сыворотке в сочетании с небольшими размерами нашей группы, не выявившими корреляции.

В заключение, наши результаты подтверждают результаты других исследований в том, что внешне здоровые взрослые собаки значительно различаются по концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови, показателю статуса витамина D. Мы провели проспективное испытание на собаках с концентрацией 25 (OH) D ниже 100 нг / мл, чтобы оценить эффективность пероральной дозы витамина D для улучшения их статуса витамина D.Мы обнаружили меньшую реакцию, чем ожидалось, при суточной дозе приблизительно 2 · 3 мкг / кг BW ^{0 · 75} , что существенно больше витамина D ₃ , чем количество, обеспечиваемое коммерчески доступными диетами этих собак. В свете того факта, что это первое исследование такого рода, в котором сообщается об этих результатах на собаках, необходимо провести дополнительное исследование, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке для собак с низким статусом витамина D.

Пероральный прием витамина D в пятикратной рекомендованной дозе незначительно влияет на концентрацию 25-гидроксивитамина D в сыворотке у собак

Abstract

Об оптимальном статусе витамина D у взрослых собак известно немного.На сегодняшний день не сообщалось об исследованиях добавок витамина D для улучшения статуса витамина D у взрослых собак. Цели этого исследования заключались в выявлении собак с низким статусом витамина D и оценке эффективности пероральной дозы холекальциферола (D ₃ ) для повышения статуса витамина D. Для этого были оценены 46 собак, находящихся в частной собственности. Из собак тридцать три (или 71,7%) имели концентрацию 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке менее 100 нг / мл, минимум, ранее предполагавшийся для достаточности витамина D у собак.Впоследствии тринадцать собак были включены в испытание добавок. Собаки получали либо добавку D ₃ ( n 7; 2 · 3 мкг / кг ^{0 · 75} ) или плацебо с оливковым маслом ( n 6) ежедневно во время еды. Концентрации 25 (OH) D в сыворотке определяли на 1, 3 и 6 неделях и в конце испытания. Только в конце испытания (9–10 недели) 25 (OH) D было значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших добавку против плацебо. Концентрации 24R, 25-дигидроксихолекальциферола в сыворотке крови, определенные в конце испытания, составляли около 40% от концентрации 25 (OH) D ₃ и существенно не различались между группами.Концентрации паратиреоидного гормона, ионизированного Ca, P и креатинина, измеренные в исходных и конечных образцах сыворотки, показали, что добавка не вызвала токсичности. Мы пришли к выводу, что добавление витамина D ₃ в дозировке, близкой к рекомендованной Национальным исследовательским советом безопасному верхнему пределу, не было эффективным для быстрого повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у здоровых взрослых собак. Необходима дальнейшая работа по оценке метаболизма перорально вводимого D ₃ у собак, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке.

Ключевые слова: холекальциферол, 25-гидроксиэргокальциферол, 24R, 25-дигидроксихолекальциферол, паратиреоидный гормон, ионизированный кальций

Сокращения: 1,25 (OH) ₂ D _{3- 3 ; 24R, 25 (OH) 2 D 3 , 24R, 25-дигидроксивитамин D 3 ; 25 (OH) D, 25-гидроксивитамин D; 25 (OH) D 2 , 25-гидроксиэргокальциферол; 25 (OH) D 3 ,25-гидроксихолекальциферол; BW — масса тела; CLIA, иммунохемилюминесцентный анализ; iCa, ионизированный Ca; NRC, Национальный исследовательский совет; ПТГ, паратиреоидный гормон}

Витамин D широко изучается в медицине человека с момента открытия его важности для развития и поддержания нормального скелета в начале 1900-х годов.В настоящее время известно, что благодаря взаимодействию рецепторов витамина D в более чем сорока тканях организма действие 1,25-дигидроксивитамина D ₃ (1,25 (OH) ₂ D ₃ ) выходит за рамки гомеостаза Ca и профилактика рахита и остеомаляции с вовлечением почти всех систем организма ⁽, 1 ⁾ .

Принято считать, что лучшим индикатором статуса витамина D является сывороточный 25-гидроксивитамин D (25 (OH) D), поскольку это самый распространенный циркулирующий метаболит витамина D, и его концентрация определяется потреблением витамина D ⁽, 2 ⁾ .Во многих отчетах определен достаточный статус витамина D у людей путем оценки хорошо установленной обратной зависимости между сывороточными концентрациями 25 (OH) D и паратироидного гормона (ПТГ) ⁽, 3 ^— 6 ⁾ . Концентрация 25 (OH) D в точке перегиба ПТГ, за пределами которой наблюдается небольшое дальнейшее снижение ПТГ, интерпретируется как показатель оптимального гомеостаза Са и маркер достаточности витамина D у людей. Однако это привело к некоторым противоречиям в определении достаточного статуса витамина D у людей, поскольку оценки концентраций 25 (OH) D, необходимых для подавления концентраций ПТГ, варьировались ⁽, 7 ⁾ .

Недавно Институт медицины рекомендовал определять дефицит витамина D у людей как концентрацию 25 (OH) D менее 20 нг / мл, а недостаточность — как 21–29 нг / мл ⁽, 8 ⁾ . Хотя концентрации, которые определены как недостаточные, являются адекватными для профилактики заболеваний костей, появляется все больше доказательств того, что концентрации более 30 нг / мл и ближе к 40 нг / мл желательны для оптимального здоровья и предотвращения хронических заболеваний у людей. ⁽, 9 ⁾ .Тем не менее, по оценкам, 20–100% пожилых мужчин и женщин в США, Канаде и Европе испытывают дефицит витамина D, и текущие рекомендованные нормы витамина D вряд ли могут обеспечить достаточный уровень витамина D для большинства людей ⁽, 8 ^, 9 ⁾ .

Несмотря на обширные исследования витамина D и здоровья людей, до недавнего времени не проводилось исследований по определению достаточности витамина D у взрослых собак. Сравнивая взаимосвязь между концентрациями 25 (OH) D и интактным ПТГ (iPTH), аналогично исследованиям на людях, исследователи обнаружили, что медиана и дисперсия в наблюдениях iPTH среди собак снизились до плато, когда концентрации 25 (OH) D были на уровне 100 нг / г. мл ⁽, 10 ⁾ .Столь же значимое снижение вариабельности средних сывороточных концентраций C-реактивного белка у собак, маркера хронического воспаления, наблюдалось при концентрациях 25 (OH) D 100–120 нг / мл. Кроме того, это исследование показало снижение относительного риска развития рака по мере увеличения концентрации 25 (OH) D. Хотя мы считаем, что эти результаты следует воспроизвести, эта информация предоставляет новые доказательства, на которых можно основывать оценку достаточности витамина D у взрослых собак для профилактики хронических заболеваний.Однако сообщения о концентрациях 25 (OH) D в сыворотке крови у практически здоровых собак сильно различаются ⁽, 10 ^— 13 ⁾ , причем многие из них могут считаться имеющими недостаточный статус витамина D.

В отличие от людей и некоторых других видов, собаки не могут эндогенно синтезировать витамин D ₃ в своей коже в ответ на УФ-свет ⁽, 14 ⁾ . Следовательно, собаки зависят от своего рациона для обеспечения своих потребностей в витамине D, в первую очередь за счет приема витамина D ₃ (холекальциферол), но также витамина D ₂ (эргокальциферол).Потребность в витамине D в рационе взрослых собак четко не установлена. Текущее рекомендуемое пособие Национальным исследовательским советом (NRC) основано на результатах исследований, определяющих пищевые концентрации витамина D, которые предотвращают аномалии скелета у щенков. В отсутствие долгосрочных исследований у взрослых, беременных и кормящих собак рекомендации по питанию щенков экстраполируются на все стадии жизни ⁽, 15 ⁾ , что может не отражать потребление, необходимое для достижения определенного результата для здоровья. .

В ветеринарии многие исследователи сообщили о связи между низкими концентрациями 25 (OH) D в сыворотке крови и опухолью тучных клеток собак ⁽, 16 ⁾ , хроническим заболеванием почек ⁽, 17 ⁾ , застойной сердечной недостаточностью ⁽, 18 ⁾ , воспалительное заболевание кишечника ⁽, 19 ⁾ и рак ⁽, 10 ⁾ . Хотя причинно-следственная связь не установлена, эти исследования служат основанием для того, что добавление витамина D может улучшить состояние здоровья, снизить риск заболевания и может использоваться в качестве дополнительной терапии при многих заболеваниях собак.На сегодняшний день нет опубликованных исследований об эффективности перорального приема витамина D для повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у собак. Таким образом, целью нашего исследования было выявление собак с низким статусом витамина D, как было определено ранее ⁽, 10 ⁾ , и оценка реакции на добавление витамина D ₃ . Наша гипотеза заключалась в том, что добавление витамина D ₃ в суточной дозе, в пять раз превышающей рекомендованную NRC, но в пределах безопасного верхнего предела NRC, эффективно и действенно повысит статус витамина D, не вызывая биохимических нарушений, совместимых с витамином D. токсичность при введении собакам с низкими концентрациями 25 (OH) D.

Материалы и методы

Животные: исследование статуса витамина D

По запросу в нашем университетском кампусе, мы рассмотрим 46 частных взрослых собак в возрасте 1 · 25–12 · 0 лет (медиана 5 · 0 лет) были вызваны для оценки статуса витамина D. Были представлены различные породы с половым распределением: тринадцать кастрированных самцов (MN), тридцать две стерилизованные самки (FS) и одна интактная самка. Масса тела (BW) варьировалась от 5,3 до 49,0 кг (в среднем 22,5 кг) с оценкой состояния тела 4–8 / 9 (в среднем 5/9).Все собаки были отмечены их владельцами как клинически здоровые на момент оценки. Исключались собаки с массой тела менее 2 · 2 кг, клинически больные собаки, собаки, которые в настоящее время принимают витаминные добавки или лекарства, которые могут изменять гомеостаз Ca, P или витамина D, или соблюдают явно несбалансированное питание. Владельцы заполнили анкету относительно диеты, окружающей среды, принимаемых лекарств и состояния здоровья. Владельцы подписали форму информированного согласия перед участием, которая включала возможность участия в последующем испытании добавок витамина D, если у их собаки был обнаружен низкий статус витамина D.Форма согласия и протокол использования животных были рассмотрены и одобрены комитетом по уходу и использованию животных нашего учреждения.

Дизайн исследования

баллов BW и состояния тела и мышц. Приблизительно 5 мл крови было взято из яремной или головной вены после отказа от еды на ночь. Экстрагированную сыворотку хранили при -20 ° C для последующего анализа концентрации 25 (OH) D.

Животные: испытание добавок витамина D

Владельцы тринадцати собак (четыре MN, девять FS), у которых в ходе исследования был обнаружен низкий статус витамина D, приняли участие в клиническом исследовании для оценки эффективности перорального приема витамина D ₃ добавка для улучшения статуса витамина D.Сигналы и другая информация для групп приведены в. Большинство собак содержалось в основном в помещении, одна собака — как в помещении, так и на улице, и одна — только на улице. Полная история рациона была доступна для двенадцати из тринадцати собак, из которых кормили одиннадцать различных коммерчески доступных сухих рационов. Рационы были помечены, чтобы указывать на то, что они прошли тестирование кормов для животных ( n 8) или состав ( n 3) в соответствии с профилями питательных веществ кормов для собак Американской ассоциации специалистов по контролю кормов (AAFCO) для содержания взрослых особей ( n 9) или все стадии жизни ( n 2).Содержание витамина D в этих диетах было получено путем обращения в компанию-производителя для типичного анализа конечного продукта, который все компании предоставили на основе энергии и «как есть». Общее суточное потребление витамина D было рассчитано для двенадцати собак с учетом количества витамина D, присутствующего в рационе, как указано производителями, истории приема пищи от владельцев и метаболического BW собаки. Оставшуюся собаку кормили ad libitum , и конкретный состав рациона время от времени менялся в зависимости от владельца, поэтому получение диетического витамина D от производителя или оценка потребления витамина D с пищей было невозможно.Одна диета, которую скармливали двум собакам, принадлежащим к одному дому, не удовлетворяла минимальным требованиям AAFCO витамина D с точки зрения энергии. Основываясь на информации о потреблении корма, предоставленной владельцем, эти собаки не потребляли достаточного количества корма для удовлетворения нормального потребления витамина D NRC на основе метаболической массы тела (0,36 мкг / кг ^0,75 ) ().

Таблица 1.

Данные о сигналах и состоянии тела для собак в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Таблица 2.

Дизайн исследования

Непосредственно перед началом исследования проба, кровь из яремной или головной кишки снова была получена после воздержания от еды на ночь.Полный анализ крови с ручным дифференцированием и панель клинического химического анализа сыворотки были получены для скрининга каждой собаки на предмет основного заболевания и определения исходных значений. Сыворотку хранили при -20 или -80 ° C в пластиковых пробирках для более поздних определений ПТГ и ионизированного Са (iCa). Собаки были отнесены к контрольной ( n, 6) или экспериментальной группе ( n 7) на основании необходимости уравновешивания размера групп, а также возраста, пола и BW. Собаки, принадлежащие к одному домохозяйству, были отнесены к одной группе.Владельцы не знали, к какой группе принадлежала их собака.

Собаки экспериментальной группы получали добавку витамина D ₃ в оливковом масле. Добавку готовили путем растворения 29 мг витамина D ₃ (холекальциферол; Sigma-Aldrich) в 1 · 26 мл этанола и смешивания 1 мл раствора с 900 г очищенного оливкового масла (Great Value; Wal-Mart Stores). для получения концентрации 23 мг / л или 23 мкг витамина D ₃ / мл. Содержимое одной капсулы витамина E (добавка витамина E 1000 МЕ, Spring Valley; Wal-Mart Stores) было добавлено для предотвращения окисления полиненасыщенных жиров (ПНЖК) в масле во время хранения (1 мг дл-α-токоферола / 1 г ПНЖК).Контрольная группа получала плацебо того же оливкового масла, приготовленного таким же образом с витамином Е. После приготовления добавку и контрольный масляный запас хранили в темном шкафу при комнатной температуре. Лечебные и контрольные собаки получали дозу на основе метаболической массы тела (0,1 мл / кг массы тела ^{± 75} в день). В этой дозировке обработанные собаки получали примерно 2,3 мкг витамина D ₃ / кг BW ^0,75 в день, количество, которое в 5,1 раза превышает рекомендуемую дозу, но не превышает безопасный верхний предел, рекомендованный NRC для содержания взрослых собак (2,6 мкг / кг BW ^0,75 ) ⁽, 20 ⁾ .Владельцы применяли суточную дозу к пище и были проинструктированы не изменять диету, окружающую среду и график упражнений во время испытания.

Собаки были повторно обследованы после начала лечения или приема плацебо на 1, 3, 6 неделях и в конце испытания, 9–10 неделях. При каждой оценке собирали венозную кровь после прекращения приема пищи в течение ночи и собирали сыворотку для анализа на общий 25 (OH) D. В конце испытания была получена дополнительная сыворотка для анализа на: 24R, 25-дигидроксивитамин D ₃ (24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ), 25-гидроксихолекальциферол (25 (OH) D ₃ ) и 25-гидроксиэргокальциферол (25 (OH) D ₂ ), ПТГ, iCa, P и креатинин.Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки для собаки перед выдачей и по завершении испытания. Концентрация витамина D ₃ была проанализирована в запасе остаточного масла для обработки и обработанной добавке, возвращенной владельцами.

Лабораторные анализы

Полный анализ крови (Sysmex xT-2000i; Sysmex America, Inc.) и клинический химический анализ сыворотки (Beckman AU 400e; Beckman Coulter, Inc.) были выполнены в Ветеринарно-медицинской диагностической лаборатории Университета Миссури ( Колумбия, Миссури, США).Общий 25 (OH) D в сыворотке оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с использованием утвержденного анализа 25 (OH) D (LIAISON; DiaSorin, Inc.). Анализ представляет собой прямой конкурентный иммуноферментный анализ хемилюминесценции (CLIA) для количественного определения 25 (OH) D в сыворотке крови. Анализ был одобрен для использования на собаках с коэффициентом вариации внутри и между анализами 4 · 0 и 3 · 4%, соответственно, ⁽, 10 ⁾ .

Определены концентрации метаболитов витамина D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ , 25 (OH) D ₂ и 25 (OH) D ₃ в аликвотах 0,5 мл размороженная сыворотка с использованием модификации метода ВЭЖХ, о котором ранее сообщалось ⁽, 21 ⁾ .Для этого образцы сыворотки (0,5 мл) инкубировали в течение ночи при температуре около 4 ° C с внутренним стандартом (2000 дезинтеграций в минуту 25- [26,27- ³ H] гидроксивитамина D ₃ ) перед их экстракцией. . AUC пиков ВЭЖХ 25 (OH) D ₃ и 25 (OH) D ₂ (Cerilliant) линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта во всем диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. Подвижную фазу собирали в течение 2-минутных периодов, совпадающих со временем элюирования стандартов, 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ (Santa Cruz Biotechnology).Фракцию 25 (OH) D ₃ сушили центрифужным испарением, восстанавливали в 6 мл сцинтилляционной смеси и подсчитывали по распаду ³ H (2000 CA Tri-Carb; Packard Instrument). К фракции 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ВЭЖХ добавляли внутренний стандарт (10 нг 25 (OH) D ₃ ), сушили центробежным испарением и восстанавливали в 130 мкл 20:80 этанола– гексаны, подвижная фаза второго метода ВЭЖХ для количественного определения 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .

Для второго метода ВЭЖХ 100 мкл восстановителя вводили в подвижную фазу, протекающую со скоростью 1,0 мл / мин на колонке (Capcell Pak Nh3, UG80, 5 мкм, 4,6 × 250 мм; Shiseido) при температуре окружающей среды. температура (21–23 ° С). AUC УФ-пиков (265 нм) стандартов 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ и 25 (OH) D ₃ линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта в диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. .

Сывороточный ПТГ оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с помощью прямого двухузлового CLIA типа «сэндвич».Ранее сообщалось о чувствительности, специфичности, CV внутри и между анализами ⁽, 10 ⁾ . Анализы iCa были выполнены в Диагностическом центре популяции и здоровья животных при Университете штата Мичиган, Лансинг, штат Мичиган, США (Nova 8 Plus; Nova Biomedical).

Анализ витамина D

Содержание витамина D ₃ в добавке с оливковым маслом определяли модификацией ранее описанного метода ⁽, 22 ⁾ .Для каждого определения 1 мл масла экстрагировали 9 мл метанола, к которому добавляли 25 мкг внутреннего стандарта (эргокальциферол; Supelco), растворенного в метаноле. Часть экстракта (10 мкл) вводили в колонку для ВЭЖХ (2 · 0 × 250 мм ² , Ultrasphere ODS 5 мкм Beckman Instruments), уравновешенную подвижной фазой (82: 13: 5, ацетонитрил-метанол-вода, по об.) с расходом 0,3 мл / мин. Концентрации витамина D ₃ и внутреннего стандарта определяли по оптической плотности AUC, зарегистрированной при 265 нм.CV концентраций витамина D ₃ , определенных в добавке, содержащей витамин D ₃ , при 25 мкг / мл, составлял 2,3%. Все анализы проводились в одной партии.

25-гидроксивитамин D

Для определения оптимальных условий хранения 25-гидроксивитамина D ₃ его стабильность оценивали в течение 15 недель замораживания и 14 дней охлаждения. Для этих анализов использовали объединенную сыворотку бигля (25 мл; Innovative Research), к которой был добавлен 25 (OH) D ₃ (2,5 мкг в 0,25 мл метанола).Аликвоты 0,5 мл сыворотки хранили в холодильнике (4 ° C) и в морозильных камерах при -20 и -80 ° C. В дни 0, 2, 4, 7, 10 и 14 хранения в холодильнике и на 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недели хранения в морозильнике определяли концентрацию 25 (OH) D ₃ в дублировать аликвоты методом, описанным для анализа сыворотки 25 (OH) D ₃ . Для этого испытания 25 (OH) D ₂ (50 нг в 10 мкл метанола) использовали в качестве внутреннего стандарта вместо метки ³ H.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием проприетарного программного обеспечения (Excel 2013, Microsoft; SAS® 9.3, SAS Institute, Inc.). Переменные наблюдения считались нормально распределенными, если вычисленное среднее и медиана отличались менее чем на 10%, статистика эксцесса и перекоса составляла от 1 до –1, а графики наблюдений стебель – лист показали несколько выбросов. Было обнаружено, что все переменные наблюдения имеют нормальное распределение, за исключением ПТГ, iCa, потребления витамина D и изменения концентрации 25 (OH) D до и после сыворотки. После преобразования журнала наблюдения PTH были нормально распределены. Для нормально распределенных наблюдений значимость различий в переменных наблюдений внутри и между контрольной и экспериментальной группами определялась с помощью парных и двухвыборочных тестов t , соответственно.Для ненормально распределенных наблюдений центральная тенденция и вариация были выражены в виде медианы и диапазона, а различия в переменных внутри и между группами были проверены на значимость с помощью знакового ранга и двухвыборочного теста Вилкоксона, соответственно. Значимость переменных корреляций проверялась с помощью корреляции Пирсона. P значения ≤ 0,05 считались значимыми.

Среднее значение и стандартное отклонение были рассчитаны для концентраций 25 (OH) D, наблюдаемых у тринадцати участвующих собак до включения в испытание добавок.Используя эти значения и размеры групп из шести и семи собак для контрольной и экспериментальной групп, соответственно, было подсчитано, что при степени β = 0,8 средняя разница в концентрациях 25 (OH) D между группами должна была бы быть равной. быть больше 25% для достижения значимости при α = 0,05.

Результаты

Обзор витамина D

Концентрация общего 25 (OH) D в сыворотке варьировала от 34,7 нг / мл до значений, превышающих линейный диапазон анализа общего 25 (OH) D> 150 нг / мл. Мы не запрашивали разведение и повторный анализ нескольких образцов сыворотки ( n 4) с концентрациями> 150 нг / мл ().Тридцать три собаки (71,7%) имели значения 25 (OH) D ниже минимальной концентрации, о которой сообщалось ранее, что указывает на достаточный статус витамина D в 100 нг / мл ⁽, 10 ⁾ . Средние значения 25 (OH) D для самок и самцов составили 82,7 (стандартное отклонение 26,0) и 83,7 (стандартное отклонение 21,5) нг / мл, соответственно, за исключением собак с концентрациями> 150 нг / мл. Концентрации 25 (OH) D существенно не различались между двумя полами.

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке у взрослых собак ( n 33) и самцов ( n 13) взрослых собак при исследовании статуса витамина D.∆ — Одна целая самка; —-, ранее сообщалось о достаточном статусе 25 (OH) D (100 нг / мл).

Испытание добавок витамина D

Средние общие концентрации 25 (OH) D для контрольной группы составляли 66 · 2 (стандартное отклонение 8 · 8) и 71 · 3 (стандартное отклонение 8 · 4) нг / мл в группе лечения до вступление в суд. Существенных различий не было обнаружено ни в контрольной, ни в экспериментальной группе для концентраций 25 (OH) D до приема добавок и на 1, 3, 6 и 9-10 неделях. Кроме того, не было обнаружено значительных различий между контрольной и экспериментальной группами до приема витамина D ₃ и через 1, 3 и 6 недель.Концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови были значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших лечение, по сравнению с контрольной группой на 9-10 неделе (). Однако анализ изменения концентраций 25 (OH) D в сыворотке от начала до конца испытания между двумя группами не достиг значимости. Начальная и конечная концентрации 25 (OH) D в сыворотке достоверно не коррелировали с исходными и конечными концентрациями iCa, PTH или P в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы. Хотя расчетное потребление витамина D с пищей в контрольной группе было значительно больше ( P = 0,03), чем в группе лечения, начальные концентрации 25 (OH) D в сыворотке не коррелировали в значительной степени с начальными оценками потребления витамина D ().

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке крови для контрольной (□; n 6) и лечебной (■; n 7) групп до начала испытания витамина D ₃ ( до испытания), а также на 1, 3, 6 и 9–10 неделях после начала приема добавок. Значения представляют собой средние значения со стандартными ошибками, представленными вертикальными полосами. * Среднее значение значительно отличалось от контрольной группы ( P = 0,05; двухвыборочный тест t ).

Лабораторные анализы

За некоторыми исключениями, результаты полного анализа крови и химического анализа сыворотки у собак были в пределах клинических лабораторных эталонных диапазонов (дополнительная таблица S1).Концентрации сывороточного ПТГ, iCa, P и креатинина существенно не изменились от начала до конца испытания ни в одной из групп. Не было обнаружено значительных различий для этих переменных между контрольной и экспериментальной группами до и по завершении исследования, за исключением iCa, где разница между группами до начала исследования была статистически значимой (). Начальная и конечная концентрации iCa достоверно не коррелировали с начальными и конечными концентрациями ПТГ в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы.

Таблица 3.

Результаты биохимических анализов сыворотки для контрольной ( n 6) и лечебной ( n 7) групп до начала и после завершения испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Метаболиты витамина D

Экстракты образцов сыворотки, используемые для количественного определения метаболитов витамина D имели четко идентифицируемые хроматографические пики при временах удерживания стандартов для 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .Хроматографический пик, совпадающий со временем удерживания стандарта 25 (OH) D ₂ , не был обнаружен ни в одном экстракте. Расчетные концентрации для сыворотки 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ составляли около 40% от рассчитанных для 25 (OH) D ₃ (). Они существенно не коррелировали с концентрациями 25 (OH) D ₃ . Средняя концентрация 25 (OH) D ₃ у собак экспериментальной группы была численно выше, чем у собак контрольной группы, но эта разница не достигла значимости.Кроме того, не было обнаружено значительной разницы между концентрациями 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в двух группах.

Таблица 4.

Концентрации метаболитов витамина D в сыворотке крови в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах, измеренные с помощью ВЭЖХ по завершении испытания добавок витамина D

(Средние значения и стандарт отклонения)

Анализ витамина D

Концентрация витамина D ₃ в исходной добавке, определенная количественно по завершении испытания, составила 20,7 мкг / мл, что составляет около 90% от первоначально запланированного включения.Каждая лечебная добавка, содержащая витамин D ₃ , выданная владельцам, была определена количественно по завершении испытания. Концентрации витамина D ₃ варьировались от 19,1 до 22,4 мкг / мл (в среднем 19,7 мкг / мл). Средняя измеренная концентрация (19,9 мкг / мл) представляла потерю 13% первоначального целевого включения (23 мкг / мл).

25-Hydroyxvitamin D

Концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранившихся при 4 ° C в течение 2, 4, 7, 10 и 14 дней, существенно не отличались от концентраций, определенных на день 0.Аналогичным образом, концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранящихся при -20 и -80 ° C в течение 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недель, существенно не отличались от концентраций, определенных в день 0. .

Обсуждение

Наша цель по оценке эффективности перорального приема витамина D для улучшения статуса витамина D у практически здоровых взрослых собак основана на предыдущих выводах о том, что собаки с хроническими заболеваниями имеют более низкие концентрации витамина D ⁽, 10 ^, 16 ^— 19 ⁾ .Подобно исследованиям в медицине, исследователи недавнего исследования определили достаточность витамина D в большой группе взрослых собак путем оценки биомаркеров, на которые влияет статус витамина D ⁽, 10 ⁾ . Было обнаружено, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке собак при очевидном асимптотическом минимуме сывороточной концентрации ПТГ составляет 100 нг / мл. Насколько нам известно, это первый опубликованный отчет, в котором определяется достаточный уровень витамина D у взрослой собаки в поддерживающем состоянии.Хотя мы считаем, что необходимо провести много исследований, чтобы подтвердить это определение достаточности витамина D, мы также считаем, что исследования, подобные нашему, которые оценивают способы достижения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови 100 нг / мл, являются оправданными.

Наш вывод о том, что большинство (71,7%) практически здоровых собак, которых мы оценивали, имели концентрацию 25 (OH) D в сыворотке ниже 100 нг / мл (), согласуется с результатами недавних исследований ⁽, 10 ^, 13 ⁾ . Причина этого открытия у собак неизвестна, но, вероятно, этому способствуют многие факторы, включая различия в включении витамина D в рационы и индивидуальные различия в потреблении, абсорбции и метаболизме витамина D.К сожалению, количество витамина D в рационе, необходимое для достижения определенного результата для здоровья, может быть трудно определить. Одна из причин заключается в том, что диетические анализы витамина D могут не учитывать всю активность витамина D. Например, жировая ткань и печень, которые являются обычными ингредиентами кормов для собак, могут содержать значительные количества 25 (OH) D по сравнению с витамином D ⁽, 23 ⁾ . Поскольку анализируемое содержание витамина D в корме для собак может быть предоставлено производителем по запросу; О содержании 25 (OH) D в кормах для собак обычно не сообщается, и мы подозреваем, что обычно не определяется.В настоящее время авторы исследуют, имеет ли пероральный 25 (OH) D большую эффективность в повышении статуса витамина D у собак. Было показано, что у людей проглоченный 25 (OH) D во много раз более эффективен, чем витамин D, в повышении сывороточного 25 (OH) D ⁽, 24 ⁾ .

Также проблематичными для определения достаточности включения витамина D в рацион для всех собак являются факторы, влияющие на сывороточные концентрации 25 (OH) D у собак, такие как пол (самцы> самки), репродуктивный статус (интактные> кастрированные) и порода ⁽) , 13 ⁾ .Эффект репродуктивного статуса не мог быть подтвержден в текущей исследуемой когорте, учитывая, что все собаки, кроме одной, были кастрированы. Однако это может быть одним из факторов, способствующих низкому статусу витамина D у подавляющего большинства собак, оцениваемых в этом исследовании.

Хотя считается, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке крови указывает на статус витамина D у собак, следует отметить, что методы определения концентрации 25 (OH) D не стандартизированы, что может усложнить интерпретацию результатов ⁽ , 25 ^— 27 ⁾ .В нашем исследовании метод CLIA использовался для измерения общих концентраций 25 (OH) D, в то время как опубликованный метод ВЭЖХ ⁽, 21 ⁾ использовался для количественной оценки метаболитов витамина D, недоступных с помощью иммуноанализа. Мы обнаружили, что концентрации 25 (OH) D в сыворотке, определенные с помощью ВЭЖХ, по сравнению с концентрациями, определенными методом CLIA, используемым коммерческой лабораторией, имеют положительную корреляцию, но постоянно ниже (данные не показаны). Это методологическое различие было аналогично тому, о котором сообщили Lensmeyer и др. . ⁽, 21 ⁾ , исследователи, от которых мы адаптировали нашу методологию ВЭЖХ. Хроматографические методы, такие как HPLC и LC / MS, по сравнению с иммунологическими методами, такими как CLIA, рекламируются как более точные ⁽, 26 ⁾ .

Наиболее значимым результатом нашего исследования была лишь небольшая разница (12%) в статусе витамина D, когда собакам давали пероральную дозу витамина D, которую мы считали существенной (). В то время как значительная разница была обнаружена в концентрациях 25 (OH) D в сыворотке между контрольной и экспериментальной группами на 9-10 неделе, концентрации 25 (OH) D в сыворотке ни у одной собаки в группе лечения увеличились до сообщенных достаточных концентраций витамина D 100. нг / мл.Таким образом, наши результаты ставят под сомнение актуальность нашей добавки с витамином D ₃ для достижения конкретных результатов в отношении здоровья взрослых собак. Причина неэффективности наших добавок витамина D не была очевидна; однако были исследованы несколько возможностей объяснения результатов, которые далее обсуждаются здесь.

Для контроля переменных, которые, как сообщалось, влияют на изменения сывороточных концентраций 25 (OH) D у людей ⁽, 28 ^, 29 ⁾ , таких как возраст, пол и BW, контрольная и экспериментальная группы были сбалансированный.В среднем это не страдали ожирением собаки, и группы имели схожие состояния тела, поэтому избыток жира в организме и, следовательно, накопление витамина D ₃ в жировой ткани, вероятно, не объясняли бы слабую реакцию на добавку витамина D у наших испытуемых.

Схема лечения, использованная в этом исследовании добавок, соответствовала графику опубликованного исследования зависимости реакции от дозы на людях, которое показало почти асимптотические концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови после примерно 10 недель ежедневного перорального приема витамина D ₃ , независимо от дозы ⁽, 30 ⁾ .В этой работе на здоровых людях наибольшее повышение концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови по сравнению с исходным уровнем произошло в течение первых 3 недель приема добавок. Хотя неизвестно, реагируют ли собаки на добавки так, как это делают люди, ожидалось, что дизайн нашего исследования позволит нам зафиксировать раннее повышение 25 (OH) D в ответ на добавки. После обнаружения слабого ответа на концентрации 25 (OH) D в нашей группе лечения, испытание было завершено через 10 недель, учитывая, что у нас было маловероятно получить дальнейшие значимые результаты при сохранении этой дозы между двумя группами в этом испытании.

Чтобы оценить практические способы добавления витамина D собакам, был выбран пероральный и добровольный путь введения в пользу внутримышечного или внутривенного пути. Как жирорастворимый витамин D требует наличия жира в рационе для адекватного усвоения животным. Разумно предположить, что наличие витамина D в масляном носителе, который обычно используется в добавках витамина D для человека и вводится с едой, будет усваиваться здоровой собакой. Поскольку исследования дозировки витамина D у взрослых собак не проводились, особенно с целью улучшения статуса витамина D, выбранная дозировка добавок витамина D держалась чуть ниже рекомендованного NRC безопасного верхнего предела.Насколько нам известно, минимальная токсичная пероральная доза витамина D для взрослых собак не сообщалась, поэтому рекомендации NRC были учтены. Токсичность витамина D в рационе приводила к клиническим признакам и биохимическим нарушениям у двух взрослых собак, когда случайное избыточное потребление было примерно в 29 раз выше безопасного верхнего предела ⁽, 12 ⁾ . Исследование на щенках, получавших пищу с концентрацией, примерно в семнадцать раз превышающей безопасный верхний предел, также не привело к клиническим признакам токсичности витамина D, но серьезно нарушило эндохондральную оссификацию ⁽, 31 ⁾ .Следовательно, введенная доза витамина D ₃ , хотя и не является несущественной, не должна была вызвать токсичность.

Считается, что отсутствие добавок витамина D собаками и снижение дозировки добавок не повлияли на наши результаты. Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки перед выдачей и в конце испытания, как указание на то, что добавка давалась в адекватных количествах. Владельцы не сообщали о проблемах, связанных с недостаточным потреблением собаками, когда добавка в масле применялась в корме.Кроме того, удержание витамина D ₃ в добавках, выдаваемых владельцам, по результатам измерения по завершении испытания, все еще было близко к безопасному верхнему пределу для витамина D в соответствии с NRC.

Сообщается, что концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак выше, чем у людей ⁽, 32 ⁾ и других домашних животных ⁽, 33 ⁾ . Исследование возможного метаболического превращения 25 (OH) D у собак в 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ было проведено по завершении испытания добавок.Как основной метаболит 25 (OH) D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ продуцируется у собак 24-гидроксилазой в почках и кишечнике ⁽, 34 ⁾ . Установлено, что концентрация 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в сыворотке положительно коррелирует с концентрацией 25 (OH) D в сыворотке ⁽, 31 ^, 35 ⁾ . Эта корреляция была документально подтверждена в исследовании щенков, в котором сообщалось, что сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ были значительно выше в экспериментальной группе, потреблявшей в восемь раз больше диетического витамина D, чем в контрольной группе ⁽, 35 ⁾ .Эта разница в концентрациях 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ была обнаружена через 6 недель приема добавок, тогда как концентрации 25 (OH) D не различались между группами во время испытания. В настоящем исследовании сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак экспериментальной группы существенно не отличались от таковых у собак контрольной группы (). Следовательно, разумно сделать вывод, что повышенная метаболическая потеря 25 (OH) D до 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ не объясняет слабый ответ, который произошел в нашей группе лечения на добавление витамина D.

Правдоподобным объяснением слабой реакции сыворотки 25 (OH) D на нашу добавку витамина D может быть низкая биодоступность добавки. Необходимы исследования факторов, влияющих на всасывание витамина D собаками, распределение и метаболизм абсорбированного витамина D. Сообщения о влиянии добавок-носителей на биодоступность витамина D при пероральном приеме немногочисленны ⁽, 36 ⁾ . Насколько нам известно, сравнения биодоступности витамина D между добавками и включением в рацион для собак отсутствуют.Витамин D, введенный в воротную кровь собак, эффективно удаляется печенью ⁽, 37 ⁾ . Следовательно, слабый ответ сывороточного 25 (OH) D на пероральный прием витамина D у собак может отражать внепеченочное поглощение витамина D, например, жировой тканью, и / или измененное 25-гидроксилирование витамина D печенью. Также сообщается, что в печени собак концентрации 25 (OH) D такие же высокие, как и концентрации витамина D ⁽, 38, ⁾ , а скорость 25-гидроксилирования витамина D может быть экспериментально изменена ⁽). , 39 ⁾ .

Ограничением настоящего исследования является небольшой размер выборки. Хотя дизайн нашего исследования был достаточно убедительным, чтобы показать, что к концу испытания (9-10 недели) собаки, получавшие добавку витамина D ₃ , имели более высокие концентрации 25 (OH) D по сравнению с контрольными собаками, ни одна собака в группе лечения достигла заявленной концентрации 25 (OH) D, указывающей на достаточность. Кроме того, обратная зависимость между концентрациями ПТГ и 25 (OH) D в сыворотке, которая ранее была обнаружена у собак, не была очевидна в настоящем исследовании.Вероятно, это было результатом большой межиндивидуальной дисперсии ПТГ с любой данной концентрацией 25 (OH) D в сыворотке в сочетании с небольшими размерами нашей группы, не выявившими корреляции.

В заключение, наши результаты подтверждают результаты других исследований в том, что внешне здоровые взрослые собаки значительно различаются по концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови, показателю статуса витамина D. Мы провели проспективное испытание на собаках с концентрацией 25 (OH) D ниже 100 нг / мл, чтобы оценить эффективность пероральной дозы витамина D для улучшения их статуса витамина D.Мы обнаружили меньшую реакцию, чем ожидалось, при суточной дозе приблизительно 2 · 3 мкг / кг BW ^{0 · 75} , что существенно больше витамина D ₃ , чем количество, обеспечиваемое коммерчески доступными диетами этих собак. В свете того факта, что это первое исследование такого рода, в котором сообщается об этих результатах на собаках, необходимо провести дополнительное исследование, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке для собак с низким статусом витамина D.

Пероральный прием витамина D в пятикратной рекомендованной дозе незначительно влияет на концентрацию 25-гидроксивитамина D в сыворотке у собак

Abstract

Об оптимальном статусе витамина D у взрослых собак известно немного.На сегодняшний день не сообщалось об исследованиях добавок витамина D для улучшения статуса витамина D у взрослых собак. Цели этого исследования заключались в выявлении собак с низким статусом витамина D и оценке эффективности пероральной дозы холекальциферола (D ₃ ) для повышения статуса витамина D. Для этого были оценены 46 собак, находящихся в частной собственности. Из собак тридцать три (или 71,7%) имели концентрацию 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке менее 100 нг / мл, минимум, ранее предполагавшийся для достаточности витамина D у собак.Впоследствии тринадцать собак были включены в испытание добавок. Собаки получали либо добавку D ₃ ( n 7; 2 · 3 мкг / кг ^{0 · 75} ) или плацебо с оливковым маслом ( n 6) ежедневно во время еды. Концентрации 25 (OH) D в сыворотке определяли на 1, 3 и 6 неделях и в конце испытания. Только в конце испытания (9–10 недели) 25 (OH) D было значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших добавку против плацебо. Концентрации 24R, 25-дигидроксихолекальциферола в сыворотке крови, определенные в конце испытания, составляли около 40% от концентрации 25 (OH) D ₃ и существенно не различались между группами.Концентрации паратиреоидного гормона, ионизированного Ca, P и креатинина, измеренные в исходных и конечных образцах сыворотки, показали, что добавка не вызвала токсичности. Мы пришли к выводу, что добавление витамина D ₃ в дозировке, близкой к рекомендованной Национальным исследовательским советом безопасному верхнему пределу, не было эффективным для быстрого повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у здоровых взрослых собак. Необходима дальнейшая работа по оценке метаболизма перорально вводимого D ₃ у собак, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке.

Ключевые слова: холекальциферол, 25-гидроксиэргокальциферол, 24R, 25-дигидроксихолекальциферол, паратиреоидный гормон, ионизированный кальций

Сокращения: 1,25 (OH) ₂ D _{3- 3 ; 24R, 25 (OH) 2 D 3 , 24R, 25-дигидроксивитамин D 3 ; 25 (OH) D, 25-гидроксивитамин D; 25 (OH) D 2 , 25-гидроксиэргокальциферол; 25 (OH) D 3 ,25-гидроксихолекальциферол; BW — масса тела; CLIA, иммунохемилюминесцентный анализ; iCa, ионизированный Ca; NRC, Национальный исследовательский совет; ПТГ, паратиреоидный гормон}

Витамин D широко изучается в медицине человека с момента открытия его важности для развития и поддержания нормального скелета в начале 1900-х годов.В настоящее время известно, что благодаря взаимодействию рецепторов витамина D в более чем сорока тканях организма действие 1,25-дигидроксивитамина D ₃ (1,25 (OH) ₂ D ₃ ) выходит за рамки гомеостаза Ca и профилактика рахита и остеомаляции с вовлечением почти всех систем организма ⁽, 1 ⁾ .

Принято считать, что лучшим индикатором статуса витамина D является сывороточный 25-гидроксивитамин D (25 (OH) D), поскольку это самый распространенный циркулирующий метаболит витамина D, и его концентрация определяется потреблением витамина D ⁽, 2 ⁾ .Во многих отчетах определен достаточный статус витамина D у людей путем оценки хорошо установленной обратной зависимости между сывороточными концентрациями 25 (OH) D и паратироидного гормона (ПТГ) ⁽, 3 ^— 6 ⁾ . Концентрация 25 (OH) D в точке перегиба ПТГ, за пределами которой наблюдается небольшое дальнейшее снижение ПТГ, интерпретируется как показатель оптимального гомеостаза Са и маркер достаточности витамина D у людей. Однако это привело к некоторым противоречиям в определении достаточного статуса витамина D у людей, поскольку оценки концентраций 25 (OH) D, необходимых для подавления концентраций ПТГ, варьировались ⁽, 7 ⁾ .

Недавно Институт медицины рекомендовал определять дефицит витамина D у людей как концентрацию 25 (OH) D менее 20 нг / мл, а недостаточность — как 21–29 нг / мл ⁽, 8 ⁾ . Хотя концентрации, которые определены как недостаточные, являются адекватными для профилактики заболеваний костей, появляется все больше доказательств того, что концентрации более 30 нг / мл и ближе к 40 нг / мл желательны для оптимального здоровья и предотвращения хронических заболеваний у людей. ⁽, 9 ⁾ .Тем не менее, по оценкам, 20–100% пожилых мужчин и женщин в США, Канаде и Европе испытывают дефицит витамина D, и текущие рекомендованные нормы витамина D вряд ли могут обеспечить достаточный уровень витамина D для большинства людей ⁽, 8 ^, 9 ⁾ .

Несмотря на обширные исследования витамина D и здоровья людей, до недавнего времени не проводилось исследований по определению достаточности витамина D у взрослых собак. Сравнивая взаимосвязь между концентрациями 25 (OH) D и интактным ПТГ (iPTH), аналогично исследованиям на людях, исследователи обнаружили, что медиана и дисперсия в наблюдениях iPTH среди собак снизились до плато, когда концентрации 25 (OH) D были на уровне 100 нг / г. мл ⁽, 10 ⁾ .Столь же значимое снижение вариабельности средних сывороточных концентраций C-реактивного белка у собак, маркера хронического воспаления, наблюдалось при концентрациях 25 (OH) D 100–120 нг / мл. Кроме того, это исследование показало снижение относительного риска развития рака по мере увеличения концентрации 25 (OH) D. Хотя мы считаем, что эти результаты следует воспроизвести, эта информация предоставляет новые доказательства, на которых можно основывать оценку достаточности витамина D у взрослых собак для профилактики хронических заболеваний.Однако сообщения о концентрациях 25 (OH) D в сыворотке крови у практически здоровых собак сильно различаются ⁽, 10 ^— 13 ⁾ , причем многие из них могут считаться имеющими недостаточный статус витамина D.

В отличие от людей и некоторых других видов, собаки не могут эндогенно синтезировать витамин D ₃ в своей коже в ответ на УФ-свет ⁽, 14 ⁾ . Следовательно, собаки зависят от своего рациона для обеспечения своих потребностей в витамине D, в первую очередь за счет приема витамина D ₃ (холекальциферол), но также витамина D ₂ (эргокальциферол).Потребность в витамине D в рационе взрослых собак четко не установлена. Текущее рекомендуемое пособие Национальным исследовательским советом (NRC) основано на результатах исследований, определяющих пищевые концентрации витамина D, которые предотвращают аномалии скелета у щенков. В отсутствие долгосрочных исследований у взрослых, беременных и кормящих собак рекомендации по питанию щенков экстраполируются на все стадии жизни ⁽, 15 ⁾ , что может не отражать потребление, необходимое для достижения определенного результата для здоровья. .

В ветеринарии многие исследователи сообщили о связи между низкими концентрациями 25 (OH) D в сыворотке крови и опухолью тучных клеток собак ⁽, 16 ⁾ , хроническим заболеванием почек ⁽, 17 ⁾ , застойной сердечной недостаточностью ⁽, 18 ⁾ , воспалительное заболевание кишечника ⁽, 19 ⁾ и рак ⁽, 10 ⁾ . Хотя причинно-следственная связь не установлена, эти исследования служат основанием для того, что добавление витамина D может улучшить состояние здоровья, снизить риск заболевания и может использоваться в качестве дополнительной терапии при многих заболеваниях собак.На сегодняшний день нет опубликованных исследований об эффективности перорального приема витамина D для повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у собак. Таким образом, целью нашего исследования было выявление собак с низким статусом витамина D, как было определено ранее ⁽, 10 ⁾ , и оценка реакции на добавление витамина D ₃ . Наша гипотеза заключалась в том, что добавление витамина D ₃ в суточной дозе, в пять раз превышающей рекомендованную NRC, но в пределах безопасного верхнего предела NRC, эффективно и действенно повысит статус витамина D, не вызывая биохимических нарушений, совместимых с витамином D. токсичность при введении собакам с низкими концентрациями 25 (OH) D.

Материалы и методы

Животные: исследование статуса витамина D

По запросу в нашем университетском кампусе, мы рассмотрим 46 частных взрослых собак в возрасте 1 · 25–12 · 0 лет (медиана 5 · 0 лет) были вызваны для оценки статуса витамина D. Были представлены различные породы с половым распределением: тринадцать кастрированных самцов (MN), тридцать две стерилизованные самки (FS) и одна интактная самка. Масса тела (BW) варьировалась от 5,3 до 49,0 кг (в среднем 22,5 кг) с оценкой состояния тела 4–8 / 9 (в среднем 5/9).Все собаки были отмечены их владельцами как клинически здоровые на момент оценки. Исключались собаки с массой тела менее 2 · 2 кг, клинически больные собаки, собаки, которые в настоящее время принимают витаминные добавки или лекарства, которые могут изменять гомеостаз Ca, P или витамина D, или соблюдают явно несбалансированное питание. Владельцы заполнили анкету относительно диеты, окружающей среды, принимаемых лекарств и состояния здоровья. Владельцы подписали форму информированного согласия перед участием, которая включала возможность участия в последующем испытании добавок витамина D, если у их собаки был обнаружен низкий статус витамина D.Форма согласия и протокол использования животных были рассмотрены и одобрены комитетом по уходу и использованию животных нашего учреждения.

Дизайн исследования

баллов BW и состояния тела и мышц. Приблизительно 5 мл крови было взято из яремной или головной вены после отказа от еды на ночь. Экстрагированную сыворотку хранили при -20 ° C для последующего анализа концентрации 25 (OH) D.

Животные: испытание добавок витамина D

Владельцы тринадцати собак (четыре MN, девять FS), у которых в ходе исследования был обнаружен низкий статус витамина D, приняли участие в клиническом исследовании для оценки эффективности перорального приема витамина D ₃ добавка для улучшения статуса витамина D.Сигналы и другая информация для групп приведены в. Большинство собак содержалось в основном в помещении, одна собака — как в помещении, так и на улице, и одна — только на улице. Полная история рациона была доступна для двенадцати из тринадцати собак, из которых кормили одиннадцать различных коммерчески доступных сухих рационов. Рационы были помечены, чтобы указывать на то, что они прошли тестирование кормов для животных ( n 8) или состав ( n 3) в соответствии с профилями питательных веществ кормов для собак Американской ассоциации специалистов по контролю кормов (AAFCO) для содержания взрослых особей ( n 9) или все стадии жизни ( n 2).Содержание витамина D в этих диетах было получено путем обращения в компанию-производителя для типичного анализа конечного продукта, который все компании предоставили на основе энергии и «как есть». Общее суточное потребление витамина D было рассчитано для двенадцати собак с учетом количества витамина D, присутствующего в рационе, как указано производителями, истории приема пищи от владельцев и метаболического BW собаки. Оставшуюся собаку кормили ad libitum , и конкретный состав рациона время от времени менялся в зависимости от владельца, поэтому получение диетического витамина D от производителя или оценка потребления витамина D с пищей было невозможно.Одна диета, которую скармливали двум собакам, принадлежащим к одному дому, не удовлетворяла минимальным требованиям AAFCO витамина D с точки зрения энергии. Основываясь на информации о потреблении корма, предоставленной владельцем, эти собаки не потребляли достаточного количества корма для удовлетворения нормального потребления витамина D NRC на основе метаболической массы тела (0,36 мкг / кг ^0,75 ) ().

Таблица 1.

Данные о сигналах и состоянии тела для собак в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Таблица 2.

Дизайн исследования

Непосредственно перед началом исследования проба, кровь из яремной или головной кишки снова была получена после воздержания от еды на ночь.Полный анализ крови с ручным дифференцированием и панель клинического химического анализа сыворотки были получены для скрининга каждой собаки на предмет основного заболевания и определения исходных значений. Сыворотку хранили при -20 или -80 ° C в пластиковых пробирках для более поздних определений ПТГ и ионизированного Са (iCa). Собаки были отнесены к контрольной ( n, 6) или экспериментальной группе ( n 7) на основании необходимости уравновешивания размера групп, а также возраста, пола и BW. Собаки, принадлежащие к одному домохозяйству, были отнесены к одной группе.Владельцы не знали, к какой группе принадлежала их собака.

Собаки экспериментальной группы получали добавку витамина D ₃ в оливковом масле. Добавку готовили путем растворения 29 мг витамина D ₃ (холекальциферол; Sigma-Aldrich) в 1 · 26 мл этанола и смешивания 1 мл раствора с 900 г очищенного оливкового масла (Great Value; Wal-Mart Stores). для получения концентрации 23 мг / л или 23 мкг витамина D ₃ / мл. Содержимое одной капсулы витамина E (добавка витамина E 1000 МЕ, Spring Valley; Wal-Mart Stores) было добавлено для предотвращения окисления полиненасыщенных жиров (ПНЖК) в масле во время хранения (1 мг дл-α-токоферола / 1 г ПНЖК).Контрольная группа получала плацебо того же оливкового масла, приготовленного таким же образом с витамином Е. После приготовления добавку и контрольный масляный запас хранили в темном шкафу при комнатной температуре. Лечебные и контрольные собаки получали дозу на основе метаболической массы тела (0,1 мл / кг массы тела ^{± 75} в день). В этой дозировке обработанные собаки получали примерно 2,3 мкг витамина D ₃ / кг BW ^0,75 в день, количество, которое в 5,1 раза превышает рекомендуемую дозу, но не превышает безопасный верхний предел, рекомендованный NRC для содержания взрослых собак (2,6 мкг / кг BW ^0,75 ) ⁽, 20 ⁾ .Владельцы применяли суточную дозу к пище и были проинструктированы не изменять диету, окружающую среду и график упражнений во время испытания.

Собаки были повторно обследованы после начала лечения или приема плацебо на 1, 3, 6 неделях и в конце испытания, 9–10 неделях. При каждой оценке собирали венозную кровь после прекращения приема пищи в течение ночи и собирали сыворотку для анализа на общий 25 (OH) D. В конце испытания была получена дополнительная сыворотка для анализа на: 24R, 25-дигидроксивитамин D ₃ (24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ), 25-гидроксихолекальциферол (25 (OH) D ₃ ) и 25-гидроксиэргокальциферол (25 (OH) D ₂ ), ПТГ, iCa, P и креатинин.Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки для собаки перед выдачей и по завершении испытания. Концентрация витамина D ₃ была проанализирована в запасе остаточного масла для обработки и обработанной добавке, возвращенной владельцами.

Лабораторные анализы

Полный анализ крови (Sysmex xT-2000i; Sysmex America, Inc.) и клинический химический анализ сыворотки (Beckman AU 400e; Beckman Coulter, Inc.) были выполнены в Ветеринарно-медицинской диагностической лаборатории Университета Миссури ( Колумбия, Миссури, США).Общий 25 (OH) D в сыворотке оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с использованием утвержденного анализа 25 (OH) D (LIAISON; DiaSorin, Inc.). Анализ представляет собой прямой конкурентный иммуноферментный анализ хемилюминесценции (CLIA) для количественного определения 25 (OH) D в сыворотке крови. Анализ был одобрен для использования на собаках с коэффициентом вариации внутри и между анализами 4 · 0 и 3 · 4%, соответственно, ⁽, 10 ⁾ .

Определены концентрации метаболитов витамина D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ , 25 (OH) D ₂ и 25 (OH) D ₃ в аликвотах 0,5 мл размороженная сыворотка с использованием модификации метода ВЭЖХ, о котором ранее сообщалось ⁽, 21 ⁾ .Для этого образцы сыворотки (0,5 мл) инкубировали в течение ночи при температуре около 4 ° C с внутренним стандартом (2000 дезинтеграций в минуту 25- [26,27- ³ H] гидроксивитамина D ₃ ) перед их экстракцией. . AUC пиков ВЭЖХ 25 (OH) D ₃ и 25 (OH) D ₂ (Cerilliant) линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта во всем диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. Подвижную фазу собирали в течение 2-минутных периодов, совпадающих со временем элюирования стандартов, 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ (Santa Cruz Biotechnology).Фракцию 25 (OH) D ₃ сушили центрифужным испарением, восстанавливали в 6 мл сцинтилляционной смеси и подсчитывали по распаду ³ H (2000 CA Tri-Carb; Packard Instrument). К фракции 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ВЭЖХ добавляли внутренний стандарт (10 нг 25 (OH) D ₃ ), сушили центробежным испарением и восстанавливали в 130 мкл 20:80 этанола– гексаны, подвижная фаза второго метода ВЭЖХ для количественного определения 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .

Для второго метода ВЭЖХ 100 мкл восстановителя вводили в подвижную фазу, протекающую со скоростью 1,0 мл / мин на колонке (Capcell Pak Nh3, UG80, 5 мкм, 4,6 × 250 мм; Shiseido) при температуре окружающей среды. температура (21–23 ° С). AUC УФ-пиков (265 нм) стандартов 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ и 25 (OH) D ₃ линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта в диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. .

Сывороточный ПТГ оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с помощью прямого двухузлового CLIA типа «сэндвич».Ранее сообщалось о чувствительности, специфичности, CV внутри и между анализами ⁽, 10 ⁾ . Анализы iCa были выполнены в Диагностическом центре популяции и здоровья животных при Университете штата Мичиган, Лансинг, штат Мичиган, США (Nova 8 Plus; Nova Biomedical).

Анализ витамина D

Содержание витамина D ₃ в добавке с оливковым маслом определяли модификацией ранее описанного метода ⁽, 22 ⁾ .Для каждого определения 1 мл масла экстрагировали 9 мл метанола, к которому добавляли 25 мкг внутреннего стандарта (эргокальциферол; Supelco), растворенного в метаноле. Часть экстракта (10 мкл) вводили в колонку для ВЭЖХ (2 · 0 × 250 мм ² , Ultrasphere ODS 5 мкм Beckman Instruments), уравновешенную подвижной фазой (82: 13: 5, ацетонитрил-метанол-вода, по об.) с расходом 0,3 мл / мин. Концентрации витамина D ₃ и внутреннего стандарта определяли по оптической плотности AUC, зарегистрированной при 265 нм.CV концентраций витамина D ₃ , определенных в добавке, содержащей витамин D ₃ , при 25 мкг / мл, составлял 2,3%. Все анализы проводились в одной партии.

25-гидроксивитамин D

Для определения оптимальных условий хранения 25-гидроксивитамина D ₃ его стабильность оценивали в течение 15 недель замораживания и 14 дней охлаждения. Для этих анализов использовали объединенную сыворотку бигля (25 мл; Innovative Research), к которой был добавлен 25 (OH) D ₃ (2,5 мкг в 0,25 мл метанола).Аликвоты 0,5 мл сыворотки хранили в холодильнике (4 ° C) и в морозильных камерах при -20 и -80 ° C. В дни 0, 2, 4, 7, 10 и 14 хранения в холодильнике и на 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недели хранения в морозильнике определяли концентрацию 25 (OH) D ₃ в дублировать аликвоты методом, описанным для анализа сыворотки 25 (OH) D ₃ . Для этого испытания 25 (OH) D ₂ (50 нг в 10 мкл метанола) использовали в качестве внутреннего стандарта вместо метки ³ H.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием проприетарного программного обеспечения (Excel 2013, Microsoft; SAS® 9.3, SAS Institute, Inc.). Переменные наблюдения считались нормально распределенными, если вычисленное среднее и медиана отличались менее чем на 10%, статистика эксцесса и перекоса составляла от 1 до –1, а графики наблюдений стебель – лист показали несколько выбросов. Было обнаружено, что все переменные наблюдения имеют нормальное распределение, за исключением ПТГ, iCa, потребления витамина D и изменения концентрации 25 (OH) D до и после сыворотки. После преобразования журнала наблюдения PTH были нормально распределены. Для нормально распределенных наблюдений значимость различий в переменных наблюдений внутри и между контрольной и экспериментальной группами определялась с помощью парных и двухвыборочных тестов t , соответственно.Для ненормально распределенных наблюдений центральная тенденция и вариация были выражены в виде медианы и диапазона, а различия в переменных внутри и между группами были проверены на значимость с помощью знакового ранга и двухвыборочного теста Вилкоксона, соответственно. Значимость переменных корреляций проверялась с помощью корреляции Пирсона. P значения ≤ 0,05 считались значимыми.

Среднее значение и стандартное отклонение были рассчитаны для концентраций 25 (OH) D, наблюдаемых у тринадцати участвующих собак до включения в испытание добавок.Используя эти значения и размеры групп из шести и семи собак для контрольной и экспериментальной групп, соответственно, было подсчитано, что при степени β = 0,8 средняя разница в концентрациях 25 (OH) D между группами должна была бы быть равной. быть больше 25% для достижения значимости при α = 0,05.

Результаты

Обзор витамина D

Концентрация общего 25 (OH) D в сыворотке варьировала от 34,7 нг / мл до значений, превышающих линейный диапазон анализа общего 25 (OH) D> 150 нг / мл. Мы не запрашивали разведение и повторный анализ нескольких образцов сыворотки ( n 4) с концентрациями> 150 нг / мл ().Тридцать три собаки (71,7%) имели значения 25 (OH) D ниже минимальной концентрации, о которой сообщалось ранее, что указывает на достаточный статус витамина D в 100 нг / мл ⁽, 10 ⁾ . Средние значения 25 (OH) D для самок и самцов составили 82,7 (стандартное отклонение 26,0) и 83,7 (стандартное отклонение 21,5) нг / мл, соответственно, за исключением собак с концентрациями> 150 нг / мл. Концентрации 25 (OH) D существенно не различались между двумя полами.

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке у взрослых собак ( n 33) и самцов ( n 13) взрослых собак при исследовании статуса витамина D.∆ — Одна целая самка; —-, ранее сообщалось о достаточном статусе 25 (OH) D (100 нг / мл).

Испытание добавок витамина D

Средние общие концентрации 25 (OH) D для контрольной группы составляли 66 · 2 (стандартное отклонение 8 · 8) и 71 · 3 (стандартное отклонение 8 · 4) нг / мл в группе лечения до вступление в суд. Существенных различий не было обнаружено ни в контрольной, ни в экспериментальной группе для концентраций 25 (OH) D до приема добавок и на 1, 3, 6 и 9-10 неделях. Кроме того, не было обнаружено значительных различий между контрольной и экспериментальной группами до приема витамина D ₃ и через 1, 3 и 6 недель.Концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови были значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших лечение, по сравнению с контрольной группой на 9-10 неделе (). Однако анализ изменения концентраций 25 (OH) D в сыворотке от начала до конца испытания между двумя группами не достиг значимости. Начальная и конечная концентрации 25 (OH) D в сыворотке достоверно не коррелировали с исходными и конечными концентрациями iCa, PTH или P в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы. Хотя расчетное потребление витамина D с пищей в контрольной группе было значительно больше ( P = 0,03), чем в группе лечения, начальные концентрации 25 (OH) D в сыворотке не коррелировали в значительной степени с начальными оценками потребления витамина D ().

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке крови для контрольной (□; n 6) и лечебной (■; n 7) групп до начала испытания витамина D ₃ ( до испытания), а также на 1, 3, 6 и 9–10 неделях после начала приема добавок. Значения представляют собой средние значения со стандартными ошибками, представленными вертикальными полосами. * Среднее значение значительно отличалось от контрольной группы ( P = 0,05; двухвыборочный тест t ).

Лабораторные анализы

За некоторыми исключениями, результаты полного анализа крови и химического анализа сыворотки у собак были в пределах клинических лабораторных эталонных диапазонов (дополнительная таблица S1).Концентрации сывороточного ПТГ, iCa, P и креатинина существенно не изменились от начала до конца испытания ни в одной из групп. Не было обнаружено значительных различий для этих переменных между контрольной и экспериментальной группами до и по завершении исследования, за исключением iCa, где разница между группами до начала исследования была статистически значимой (). Начальная и конечная концентрации iCa достоверно не коррелировали с начальными и конечными концентрациями ПТГ в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы.

Таблица 3.

Результаты биохимических анализов сыворотки для контрольной ( n 6) и лечебной ( n 7) групп до начала и после завершения испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Метаболиты витамина D

Экстракты образцов сыворотки, используемые для количественного определения метаболитов витамина D имели четко идентифицируемые хроматографические пики при временах удерживания стандартов для 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .Хроматографический пик, совпадающий со временем удерживания стандарта 25 (OH) D ₂ , не был обнаружен ни в одном экстракте. Расчетные концентрации для сыворотки 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ составляли около 40% от рассчитанных для 25 (OH) D ₃ (). Они существенно не коррелировали с концентрациями 25 (OH) D ₃ . Средняя концентрация 25 (OH) D ₃ у собак экспериментальной группы была численно выше, чем у собак контрольной группы, но эта разница не достигла значимости.Кроме того, не было обнаружено значительной разницы между концентрациями 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в двух группах.

Таблица 4.

Концентрации метаболитов витамина D в сыворотке крови в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах, измеренные с помощью ВЭЖХ по завершении испытания добавок витамина D

(Средние значения и стандарт отклонения)

Анализ витамина D

Концентрация витамина D ₃ в исходной добавке, определенная количественно по завершении испытания, составила 20,7 мкг / мл, что составляет около 90% от первоначально запланированного включения.Каждая лечебная добавка, содержащая витамин D ₃ , выданная владельцам, была определена количественно по завершении испытания. Концентрации витамина D ₃ варьировались от 19,1 до 22,4 мкг / мл (в среднем 19,7 мкг / мл). Средняя измеренная концентрация (19,9 мкг / мл) представляла потерю 13% первоначального целевого включения (23 мкг / мл).

25-Hydroyxvitamin D

Концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранившихся при 4 ° C в течение 2, 4, 7, 10 и 14 дней, существенно не отличались от концентраций, определенных на день 0.Аналогичным образом, концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранящихся при -20 и -80 ° C в течение 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недель, существенно не отличались от концентраций, определенных в день 0. .

Обсуждение

Наша цель по оценке эффективности перорального приема витамина D для улучшения статуса витамина D у практически здоровых взрослых собак основана на предыдущих выводах о том, что собаки с хроническими заболеваниями имеют более низкие концентрации витамина D ⁽, 10 ^, 16 ^— 19 ⁾ .Подобно исследованиям в медицине, исследователи недавнего исследования определили достаточность витамина D в большой группе взрослых собак путем оценки биомаркеров, на которые влияет статус витамина D ⁽, 10 ⁾ . Было обнаружено, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке собак при очевидном асимптотическом минимуме сывороточной концентрации ПТГ составляет 100 нг / мл. Насколько нам известно, это первый опубликованный отчет, в котором определяется достаточный уровень витамина D у взрослой собаки в поддерживающем состоянии.Хотя мы считаем, что необходимо провести много исследований, чтобы подтвердить это определение достаточности витамина D, мы также считаем, что исследования, подобные нашему, которые оценивают способы достижения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови 100 нг / мл, являются оправданными.

Наш вывод о том, что большинство (71,7%) практически здоровых собак, которых мы оценивали, имели концентрацию 25 (OH) D в сыворотке ниже 100 нг / мл (), согласуется с результатами недавних исследований ⁽, 10 ^, 13 ⁾ . Причина этого открытия у собак неизвестна, но, вероятно, этому способствуют многие факторы, включая различия в включении витамина D в рационы и индивидуальные различия в потреблении, абсорбции и метаболизме витамина D.К сожалению, количество витамина D в рационе, необходимое для достижения определенного результата для здоровья, может быть трудно определить. Одна из причин заключается в том, что диетические анализы витамина D могут не учитывать всю активность витамина D. Например, жировая ткань и печень, которые являются обычными ингредиентами кормов для собак, могут содержать значительные количества 25 (OH) D по сравнению с витамином D ⁽, 23 ⁾ . Поскольку анализируемое содержание витамина D в корме для собак может быть предоставлено производителем по запросу; О содержании 25 (OH) D в кормах для собак обычно не сообщается, и мы подозреваем, что обычно не определяется.В настоящее время авторы исследуют, имеет ли пероральный 25 (OH) D большую эффективность в повышении статуса витамина D у собак. Было показано, что у людей проглоченный 25 (OH) D во много раз более эффективен, чем витамин D, в повышении сывороточного 25 (OH) D ⁽, 24 ⁾ .

Также проблематичными для определения достаточности включения витамина D в рацион для всех собак являются факторы, влияющие на сывороточные концентрации 25 (OH) D у собак, такие как пол (самцы> самки), репродуктивный статус (интактные> кастрированные) и порода ⁽) , 13 ⁾ .Эффект репродуктивного статуса не мог быть подтвержден в текущей исследуемой когорте, учитывая, что все собаки, кроме одной, были кастрированы. Однако это может быть одним из факторов, способствующих низкому статусу витамина D у подавляющего большинства собак, оцениваемых в этом исследовании.

Хотя считается, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке крови указывает на статус витамина D у собак, следует отметить, что методы определения концентрации 25 (OH) D не стандартизированы, что может усложнить интерпретацию результатов ⁽ , 25 ^— 27 ⁾ .В нашем исследовании метод CLIA использовался для измерения общих концентраций 25 (OH) D, в то время как опубликованный метод ВЭЖХ ⁽, 21 ⁾ использовался для количественной оценки метаболитов витамина D, недоступных с помощью иммуноанализа. Мы обнаружили, что концентрации 25 (OH) D в сыворотке, определенные с помощью ВЭЖХ, по сравнению с концентрациями, определенными методом CLIA, используемым коммерческой лабораторией, имеют положительную корреляцию, но постоянно ниже (данные не показаны). Это методологическое различие было аналогично тому, о котором сообщили Lensmeyer и др. . ⁽, 21 ⁾ , исследователи, от которых мы адаптировали нашу методологию ВЭЖХ. Хроматографические методы, такие как HPLC и LC / MS, по сравнению с иммунологическими методами, такими как CLIA, рекламируются как более точные ⁽, 26 ⁾ .

Наиболее значимым результатом нашего исследования была лишь небольшая разница (12%) в статусе витамина D, когда собакам давали пероральную дозу витамина D, которую мы считали существенной (). В то время как значительная разница была обнаружена в концентрациях 25 (OH) D в сыворотке между контрольной и экспериментальной группами на 9-10 неделе, концентрации 25 (OH) D в сыворотке ни у одной собаки в группе лечения увеличились до сообщенных достаточных концентраций витамина D 100. нг / мл.Таким образом, наши результаты ставят под сомнение актуальность нашей добавки с витамином D ₃ для достижения конкретных результатов в отношении здоровья взрослых собак. Причина неэффективности наших добавок витамина D не была очевидна; однако были исследованы несколько возможностей объяснения результатов, которые далее обсуждаются здесь.

Для контроля переменных, которые, как сообщалось, влияют на изменения сывороточных концентраций 25 (OH) D у людей ⁽, 28 ^, 29 ⁾ , таких как возраст, пол и BW, контрольная и экспериментальная группы были сбалансированный.В среднем это не страдали ожирением собаки, и группы имели схожие состояния тела, поэтому избыток жира в организме и, следовательно, накопление витамина D ₃ в жировой ткани, вероятно, не объясняли бы слабую реакцию на добавку витамина D у наших испытуемых.

Схема лечения, использованная в этом исследовании добавок, соответствовала графику опубликованного исследования зависимости реакции от дозы на людях, которое показало почти асимптотические концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови после примерно 10 недель ежедневного перорального приема витамина D ₃ , независимо от дозы ⁽, 30 ⁾ .В этой работе на здоровых людях наибольшее повышение концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови по сравнению с исходным уровнем произошло в течение первых 3 недель приема добавок. Хотя неизвестно, реагируют ли собаки на добавки так, как это делают люди, ожидалось, что дизайн нашего исследования позволит нам зафиксировать раннее повышение 25 (OH) D в ответ на добавки. После обнаружения слабого ответа на концентрации 25 (OH) D в нашей группе лечения, испытание было завершено через 10 недель, учитывая, что у нас было маловероятно получить дальнейшие значимые результаты при сохранении этой дозы между двумя группами в этом испытании.

Чтобы оценить практические способы добавления витамина D собакам, был выбран пероральный и добровольный путь введения в пользу внутримышечного или внутривенного пути. Как жирорастворимый витамин D требует наличия жира в рационе для адекватного усвоения животным. Разумно предположить, что наличие витамина D в масляном носителе, который обычно используется в добавках витамина D для человека и вводится с едой, будет усваиваться здоровой собакой. Поскольку исследования дозировки витамина D у взрослых собак не проводились, особенно с целью улучшения статуса витамина D, выбранная дозировка добавок витамина D держалась чуть ниже рекомендованного NRC безопасного верхнего предела.Насколько нам известно, минимальная токсичная пероральная доза витамина D для взрослых собак не сообщалась, поэтому рекомендации NRC были учтены. Токсичность витамина D в рационе приводила к клиническим признакам и биохимическим нарушениям у двух взрослых собак, когда случайное избыточное потребление было примерно в 29 раз выше безопасного верхнего предела ⁽, 12 ⁾ . Исследование на щенках, получавших пищу с концентрацией, примерно в семнадцать раз превышающей безопасный верхний предел, также не привело к клиническим признакам токсичности витамина D, но серьезно нарушило эндохондральную оссификацию ⁽, 31 ⁾ .Следовательно, введенная доза витамина D ₃ , хотя и не является несущественной, не должна была вызвать токсичность.

Считается, что отсутствие добавок витамина D собаками и снижение дозировки добавок не повлияли на наши результаты. Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки перед выдачей и в конце испытания, как указание на то, что добавка давалась в адекватных количествах. Владельцы не сообщали о проблемах, связанных с недостаточным потреблением собаками, когда добавка в масле применялась в корме.Кроме того, удержание витамина D ₃ в добавках, выдаваемых владельцам, по результатам измерения по завершении испытания, все еще было близко к безопасному верхнему пределу для витамина D в соответствии с NRC.

Сообщается, что концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак выше, чем у людей ⁽, 32 ⁾ и других домашних животных ⁽, 33 ⁾ . Исследование возможного метаболического превращения 25 (OH) D у собак в 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ было проведено по завершении испытания добавок.Как основной метаболит 25 (OH) D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ продуцируется у собак 24-гидроксилазой в почках и кишечнике ⁽, 34 ⁾ . Установлено, что концентрация 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в сыворотке положительно коррелирует с концентрацией 25 (OH) D в сыворотке ⁽, 31 ^, 35 ⁾ . Эта корреляция была документально подтверждена в исследовании щенков, в котором сообщалось, что сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ были значительно выше в экспериментальной группе, потреблявшей в восемь раз больше диетического витамина D, чем в контрольной группе ⁽, 35 ⁾ .Эта разница в концентрациях 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ была обнаружена через 6 недель приема добавок, тогда как концентрации 25 (OH) D не различались между группами во время испытания. В настоящем исследовании сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак экспериментальной группы существенно не отличались от таковых у собак контрольной группы (). Следовательно, разумно сделать вывод, что повышенная метаболическая потеря 25 (OH) D до 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ не объясняет слабый ответ, который произошел в нашей группе лечения на добавление витамина D.

Правдоподобным объяснением слабой реакции сыворотки 25 (OH) D на нашу добавку витамина D может быть низкая биодоступность добавки. Необходимы исследования факторов, влияющих на всасывание витамина D собаками, распределение и метаболизм абсорбированного витамина D. Сообщения о влиянии добавок-носителей на биодоступность витамина D при пероральном приеме немногочисленны ⁽, 36 ⁾ . Насколько нам известно, сравнения биодоступности витамина D между добавками и включением в рацион для собак отсутствуют.Витамин D, введенный в воротную кровь собак, эффективно удаляется печенью ⁽, 37 ⁾ . Следовательно, слабый ответ сывороточного 25 (OH) D на пероральный прием витамина D у собак может отражать внепеченочное поглощение витамина D, например, жировой тканью, и / или измененное 25-гидроксилирование витамина D печенью. Также сообщается, что в печени собак концентрации 25 (OH) D такие же высокие, как и концентрации витамина D ⁽, 38, ⁾ , а скорость 25-гидроксилирования витамина D может быть экспериментально изменена ⁽). , 39 ⁾ .

Ограничением настоящего исследования является небольшой размер выборки. Хотя дизайн нашего исследования был достаточно убедительным, чтобы показать, что к концу испытания (9-10 недели) собаки, получавшие добавку витамина D ₃ , имели более высокие концентрации 25 (OH) D по сравнению с контрольными собаками, ни одна собака в группе лечения достигла заявленной концентрации 25 (OH) D, указывающей на достаточность. Кроме того, обратная зависимость между концентрациями ПТГ и 25 (OH) D в сыворотке, которая ранее была обнаружена у собак, не была очевидна в настоящем исследовании.Вероятно, это было результатом большой межиндивидуальной дисперсии ПТГ с любой данной концентрацией 25 (OH) D в сыворотке в сочетании с небольшими размерами нашей группы, не выявившими корреляции.

В заключение, наши результаты подтверждают результаты других исследований в том, что внешне здоровые взрослые собаки значительно различаются по концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови, показателю статуса витамина D. Мы провели проспективное испытание на собаках с концентрацией 25 (OH) D ниже 100 нг / мл, чтобы оценить эффективность пероральной дозы витамина D для улучшения их статуса витамина D.Мы обнаружили меньшую реакцию, чем ожидалось, при суточной дозе приблизительно 2 · 3 мкг / кг BW ^{0 · 75} , что существенно больше витамина D ₃ , чем количество, обеспечиваемое коммерчески доступными диетами этих собак. В свете того факта, что это первое исследование такого рода, в котором сообщается об этих результатах на собаках, необходимо провести дополнительное исследование, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке для собак с низким статусом витамина D.

Пероральный прием витамина D в пятикратной рекомендованной дозе незначительно влияет на концентрацию 25-гидроксивитамина D в сыворотке у собак

Abstract

Об оптимальном статусе витамина D у взрослых собак известно немного.На сегодняшний день не сообщалось об исследованиях добавок витамина D для улучшения статуса витамина D у взрослых собак. Цели этого исследования заключались в выявлении собак с низким статусом витамина D и оценке эффективности пероральной дозы холекальциферола (D ₃ ) для повышения статуса витамина D. Для этого были оценены 46 собак, находящихся в частной собственности. Из собак тридцать три (или 71,7%) имели концентрацию 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке менее 100 нг / мл, минимум, ранее предполагавшийся для достаточности витамина D у собак.Впоследствии тринадцать собак были включены в испытание добавок. Собаки получали либо добавку D ₃ ( n 7; 2 · 3 мкг / кг ^{0 · 75} ) или плацебо с оливковым маслом ( n 6) ежедневно во время еды. Концентрации 25 (OH) D в сыворотке определяли на 1, 3 и 6 неделях и в конце испытания. Только в конце испытания (9–10 недели) 25 (OH) D было значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших добавку против плацебо. Концентрации 24R, 25-дигидроксихолекальциферола в сыворотке крови, определенные в конце испытания, составляли около 40% от концентрации 25 (OH) D ₃ и существенно не различались между группами.Концентрации паратиреоидного гормона, ионизированного Ca, P и креатинина, измеренные в исходных и конечных образцах сыворотки, показали, что добавка не вызвала токсичности. Мы пришли к выводу, что добавление витамина D ₃ в дозировке, близкой к рекомендованной Национальным исследовательским советом безопасному верхнему пределу, не было эффективным для быстрого повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у здоровых взрослых собак. Необходима дальнейшая работа по оценке метаболизма перорально вводимого D ₃ у собак, прежде чем можно будет дать рекомендации по дозировке.

Ключевые слова: холекальциферол, 25-гидроксиэргокальциферол, 24R, 25-дигидроксихолекальциферол, паратиреоидный гормон, ионизированный кальций

Сокращения: 1,25 (OH) ₂ D _{3- 3 ; 24R, 25 (OH) 2 D 3 , 24R, 25-дигидроксивитамин D 3 ; 25 (OH) D, 25-гидроксивитамин D; 25 (OH) D 2 , 25-гидроксиэргокальциферол; 25 (OH) D 3 ,25-гидроксихолекальциферол; BW — масса тела; CLIA, иммунохемилюминесцентный анализ; iCa, ионизированный Ca; NRC, Национальный исследовательский совет; ПТГ, паратиреоидный гормон}

Витамин D широко изучается в медицине человека с момента открытия его важности для развития и поддержания нормального скелета в начале 1900-х годов.В настоящее время известно, что благодаря взаимодействию рецепторов витамина D в более чем сорока тканях организма действие 1,25-дигидроксивитамина D ₃ (1,25 (OH) ₂ D ₃ ) выходит за рамки гомеостаза Ca и профилактика рахита и остеомаляции с вовлечением почти всех систем организма ⁽, 1 ⁾ .

Принято считать, что лучшим индикатором статуса витамина D является сывороточный 25-гидроксивитамин D (25 (OH) D), поскольку это самый распространенный циркулирующий метаболит витамина D, и его концентрация определяется потреблением витамина D ⁽, 2 ⁾ .Во многих отчетах определен достаточный статус витамина D у людей путем оценки хорошо установленной обратной зависимости между сывороточными концентрациями 25 (OH) D и паратироидного гормона (ПТГ) ⁽, 3 ^— 6 ⁾ . Концентрация 25 (OH) D в точке перегиба ПТГ, за пределами которой наблюдается небольшое дальнейшее снижение ПТГ, интерпретируется как показатель оптимального гомеостаза Са и маркер достаточности витамина D у людей. Однако это привело к некоторым противоречиям в определении достаточного статуса витамина D у людей, поскольку оценки концентраций 25 (OH) D, необходимых для подавления концентраций ПТГ, варьировались ⁽, 7 ⁾ .

Недавно Институт медицины рекомендовал определять дефицит витамина D у людей как концентрацию 25 (OH) D менее 20 нг / мл, а недостаточность — как 21–29 нг / мл ⁽, 8 ⁾ . Хотя концентрации, которые определены как недостаточные, являются адекватными для профилактики заболеваний костей, появляется все больше доказательств того, что концентрации более 30 нг / мл и ближе к 40 нг / мл желательны для оптимального здоровья и предотвращения хронических заболеваний у людей. ⁽, 9 ⁾ .Тем не менее, по оценкам, 20–100% пожилых мужчин и женщин в США, Канаде и Европе испытывают дефицит витамина D, и текущие рекомендованные нормы витамина D вряд ли могут обеспечить достаточный уровень витамина D для большинства людей ⁽, 8 ^, 9 ⁾ .

Несмотря на обширные исследования витамина D и здоровья людей, до недавнего времени не проводилось исследований по определению достаточности витамина D у взрослых собак. Сравнивая взаимосвязь между концентрациями 25 (OH) D и интактным ПТГ (iPTH), аналогично исследованиям на людях, исследователи обнаружили, что медиана и дисперсия в наблюдениях iPTH среди собак снизились до плато, когда концентрации 25 (OH) D были на уровне 100 нг / г. мл ⁽, 10 ⁾ .Столь же значимое снижение вариабельности средних сывороточных концентраций C-реактивного белка у собак, маркера хронического воспаления, наблюдалось при концентрациях 25 (OH) D 100–120 нг / мл. Кроме того, это исследование показало снижение относительного риска развития рака по мере увеличения концентрации 25 (OH) D. Хотя мы считаем, что эти результаты следует воспроизвести, эта информация предоставляет новые доказательства, на которых можно основывать оценку достаточности витамина D у взрослых собак для профилактики хронических заболеваний.Однако сообщения о концентрациях 25 (OH) D в сыворотке крови у практически здоровых собак сильно различаются ⁽, 10 ^— 13 ⁾ , причем многие из них могут считаться имеющими недостаточный статус витамина D.

В отличие от людей и некоторых других видов, собаки не могут эндогенно синтезировать витамин D ₃ в своей коже в ответ на УФ-свет ⁽, 14 ⁾ . Следовательно, собаки зависят от своего рациона для обеспечения своих потребностей в витамине D, в первую очередь за счет приема витамина D ₃ (холекальциферол), но также витамина D ₂ (эргокальциферол).Потребность в витамине D в рационе взрослых собак четко не установлена. Текущее рекомендуемое пособие Национальным исследовательским советом (NRC) основано на результатах исследований, определяющих пищевые концентрации витамина D, которые предотвращают аномалии скелета у щенков. В отсутствие долгосрочных исследований у взрослых, беременных и кормящих собак рекомендации по питанию щенков экстраполируются на все стадии жизни ⁽, 15 ⁾ , что может не отражать потребление, необходимое для достижения определенного результата для здоровья. .

В ветеринарии многие исследователи сообщили о связи между низкими концентрациями 25 (OH) D в сыворотке крови и опухолью тучных клеток собак ⁽, 16 ⁾ , хроническим заболеванием почек ⁽, 17 ⁾ , застойной сердечной недостаточностью ⁽, 18 ⁾ , воспалительное заболевание кишечника ⁽, 19 ⁾ и рак ⁽, 10 ⁾ . Хотя причинно-следственная связь не установлена, эти исследования служат основанием для того, что добавление витамина D может улучшить состояние здоровья, снизить риск заболевания и может использоваться в качестве дополнительной терапии при многих заболеваниях собак.На сегодняшний день нет опубликованных исследований об эффективности перорального приема витамина D для повышения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови у собак. Таким образом, целью нашего исследования было выявление собак с низким статусом витамина D, как было определено ранее ⁽, 10 ⁾ , и оценка реакции на добавление витамина D ₃ . Наша гипотеза заключалась в том, что добавление витамина D ₃ в суточной дозе, в пять раз превышающей рекомендованную NRC, но в пределах безопасного верхнего предела NRC, эффективно и действенно повысит статус витамина D, не вызывая биохимических нарушений, совместимых с витамином D. токсичность при введении собакам с низкими концентрациями 25 (OH) D.

Материалы и методы

Животные: исследование статуса витамина D

По запросу в нашем университетском кампусе, мы рассмотрим 46 частных взрослых собак в возрасте 1 · 25–12 · 0 лет (медиана 5 · 0 лет) были вызваны для оценки статуса витамина D. Были представлены различные породы с половым распределением: тринадцать кастрированных самцов (MN), тридцать две стерилизованные самки (FS) и одна интактная самка. Масса тела (BW) варьировалась от 5,3 до 49,0 кг (в среднем 22,5 кг) с оценкой состояния тела 4–8 / 9 (в среднем 5/9).Все собаки были отмечены их владельцами как клинически здоровые на момент оценки. Исключались собаки с массой тела менее 2 · 2 кг, клинически больные собаки, собаки, которые в настоящее время принимают витаминные добавки или лекарства, которые могут изменять гомеостаз Ca, P или витамина D, или соблюдают явно несбалансированное питание. Владельцы заполнили анкету относительно диеты, окружающей среды, принимаемых лекарств и состояния здоровья. Владельцы подписали форму информированного согласия перед участием, которая включала возможность участия в последующем испытании добавок витамина D, если у их собаки был обнаружен низкий статус витамина D.Форма согласия и протокол использования животных были рассмотрены и одобрены комитетом по уходу и использованию животных нашего учреждения.

Дизайн исследования

баллов BW и состояния тела и мышц. Приблизительно 5 мл крови было взято из яремной или головной вены после отказа от еды на ночь. Экстрагированную сыворотку хранили при -20 ° C для последующего анализа концентрации 25 (OH) D.

Животные: испытание добавок витамина D

Владельцы тринадцати собак (четыре MN, девять FS), у которых в ходе исследования был обнаружен низкий статус витамина D, приняли участие в клиническом исследовании для оценки эффективности перорального приема витамина D ₃ добавка для улучшения статуса витамина D.Сигналы и другая информация для групп приведены в. Большинство собак содержалось в основном в помещении, одна собака — как в помещении, так и на улице, и одна — только на улице. Полная история рациона была доступна для двенадцати из тринадцати собак, из которых кормили одиннадцать различных коммерчески доступных сухих рационов. Рационы были помечены, чтобы указывать на то, что они прошли тестирование кормов для животных ( n 8) или состав ( n 3) в соответствии с профилями питательных веществ кормов для собак Американской ассоциации специалистов по контролю кормов (AAFCO) для содержания взрослых особей ( n 9) или все стадии жизни ( n 2).Содержание витамина D в этих диетах было получено путем обращения в компанию-производителя для типичного анализа конечного продукта, который все компании предоставили на основе энергии и «как есть». Общее суточное потребление витамина D было рассчитано для двенадцати собак с учетом количества витамина D, присутствующего в рационе, как указано производителями, истории приема пищи от владельцев и метаболического BW собаки. Оставшуюся собаку кормили ad libitum , и конкретный состав рациона время от времени менялся в зависимости от владельца, поэтому получение диетического витамина D от производителя или оценка потребления витамина D с пищей было невозможно.Одна диета, которую скармливали двум собакам, принадлежащим к одному дому, не удовлетворяла минимальным требованиям AAFCO витамина D с точки зрения энергии. Основываясь на информации о потреблении корма, предоставленной владельцем, эти собаки не потребляли достаточного количества корма для удовлетворения нормального потребления витамина D NRC на основе метаболической массы тела (0,36 мкг / кг ^0,75 ) ().

Таблица 1.

Данные о сигналах и состоянии тела для собак в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Таблица 2.

Дизайн исследования

Непосредственно перед началом исследования проба, кровь из яремной или головной кишки снова была получена после воздержания от еды на ночь.Полный анализ крови с ручным дифференцированием и панель клинического химического анализа сыворотки были получены для скрининга каждой собаки на предмет основного заболевания и определения исходных значений. Сыворотку хранили при -20 или -80 ° C в пластиковых пробирках для более поздних определений ПТГ и ионизированного Са (iCa). Собаки были отнесены к контрольной ( n, 6) или экспериментальной группе ( n 7) на основании необходимости уравновешивания размера групп, а также возраста, пола и BW. Собаки, принадлежащие к одному домохозяйству, были отнесены к одной группе.Владельцы не знали, к какой группе принадлежала их собака.

Собаки экспериментальной группы получали добавку витамина D ₃ в оливковом масле. Добавку готовили путем растворения 29 мг витамина D ₃ (холекальциферол; Sigma-Aldrich) в 1 · 26 мл этанола и смешивания 1 мл раствора с 900 г очищенного оливкового масла (Great Value; Wal-Mart Stores). для получения концентрации 23 мг / л или 23 мкг витамина D ₃ / мл. Содержимое одной капсулы витамина E (добавка витамина E 1000 МЕ, Spring Valley; Wal-Mart Stores) было добавлено для предотвращения окисления полиненасыщенных жиров (ПНЖК) в масле во время хранения (1 мг дл-α-токоферола / 1 г ПНЖК).Контрольная группа получала плацебо того же оливкового масла, приготовленного таким же образом с витамином Е. После приготовления добавку и контрольный масляный запас хранили в темном шкафу при комнатной температуре. Лечебные и контрольные собаки получали дозу на основе метаболической массы тела (0,1 мл / кг массы тела ^{± 75} в день). В этой дозировке обработанные собаки получали примерно 2,3 мкг витамина D ₃ / кг BW ^0,75 в день, количество, которое в 5,1 раза превышает рекомендуемую дозу, но не превышает безопасный верхний предел, рекомендованный NRC для содержания взрослых собак (2,6 мкг / кг BW ^0,75 ) ⁽, 20 ⁾ .Владельцы применяли суточную дозу к пище и были проинструктированы не изменять диету, окружающую среду и график упражнений во время испытания.

Собаки были повторно обследованы после начала лечения или приема плацебо на 1, 3, 6 неделях и в конце испытания, 9–10 неделях. При каждой оценке собирали венозную кровь после прекращения приема пищи в течение ночи и собирали сыворотку для анализа на общий 25 (OH) D. В конце испытания была получена дополнительная сыворотка для анализа на: 24R, 25-дигидроксивитамин D ₃ (24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ), 25-гидроксихолекальциферол (25 (OH) D ₃ ) и 25-гидроксиэргокальциферол (25 (OH) D ₂ ), ПТГ, iCa, P и креатинин.Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки для собаки перед выдачей и по завершении испытания. Концентрация витамина D ₃ была проанализирована в запасе остаточного масла для обработки и обработанной добавке, возвращенной владельцами.

Лабораторные анализы

Полный анализ крови (Sysmex xT-2000i; Sysmex America, Inc.) и клинический химический анализ сыворотки (Beckman AU 400e; Beckman Coulter, Inc.) были выполнены в Ветеринарно-медицинской диагностической лаборатории Университета Миссури ( Колумбия, Миссури, США).Общий 25 (OH) D в сыворотке оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с использованием утвержденного анализа 25 (OH) D (LIAISON; DiaSorin, Inc.). Анализ представляет собой прямой конкурентный иммуноферментный анализ хемилюминесценции (CLIA) для количественного определения 25 (OH) D в сыворотке крови. Анализ был одобрен для использования на собаках с коэффициентом вариации внутри и между анализами 4 · 0 и 3 · 4%, соответственно, ⁽, 10 ⁾ .

Определены концентрации метаболитов витамина D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ , 25 (OH) D ₂ и 25 (OH) D ₃ в аликвотах 0,5 мл размороженная сыворотка с использованием модификации метода ВЭЖХ, о котором ранее сообщалось ⁽, 21 ⁾ .Для этого образцы сыворотки (0,5 мл) инкубировали в течение ночи при температуре около 4 ° C с внутренним стандартом (2000 дезинтеграций в минуту 25- [26,27- ³ H] гидроксивитамина D ₃ ) перед их экстракцией. . AUC пиков ВЭЖХ 25 (OH) D ₃ и 25 (OH) D ₂ (Cerilliant) линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта во всем диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. Подвижную фазу собирали в течение 2-минутных периодов, совпадающих со временем элюирования стандартов, 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ (Santa Cruz Biotechnology).Фракцию 25 (OH) D ₃ сушили центрифужным испарением, восстанавливали в 6 мл сцинтилляционной смеси и подсчитывали по распаду ³ H (2000 CA Tri-Carb; Packard Instrument). К фракции 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ ВЭЖХ добавляли внутренний стандарт (10 нг 25 (OH) D ₃ ), сушили центробежным испарением и восстанавливали в 130 мкл 20:80 этанола– гексаны, подвижная фаза второго метода ВЭЖХ для количественного определения 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .

Для второго метода ВЭЖХ 100 мкл восстановителя вводили в подвижную фазу, протекающую со скоростью 1,0 мл / мин на колонке (Capcell Pak Nh3, UG80, 5 мкм, 4,6 × 250 мм; Shiseido) при температуре окружающей среды. температура (21–23 ° С). AUC УФ-пиков (265 нм) стандартов 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ и 25 (OH) D ₃ линейно увеличивалась с увеличением массы введенного стандарта в диапазоне концентраций, обнаруженных в образцах сыворотки. .

Сывороточный ПТГ оценивался коммерческой лабораторией (Институт ветеринарной диагностики, Сими-Вэлли, Калифорния, США) с помощью прямого двухузлового CLIA типа «сэндвич».Ранее сообщалось о чувствительности, специфичности, CV внутри и между анализами ⁽, 10 ⁾ . Анализы iCa были выполнены в Диагностическом центре популяции и здоровья животных при Университете штата Мичиган, Лансинг, штат Мичиган, США (Nova 8 Plus; Nova Biomedical).

Анализ витамина D

Содержание витамина D ₃ в добавке с оливковым маслом определяли модификацией ранее описанного метода ⁽, 22 ⁾ .Для каждого определения 1 мл масла экстрагировали 9 мл метанола, к которому добавляли 25 мкг внутреннего стандарта (эргокальциферол; Supelco), растворенного в метаноле. Часть экстракта (10 мкл) вводили в колонку для ВЭЖХ (2 · 0 × 250 мм ² , Ultrasphere ODS 5 мкм Beckman Instruments), уравновешенную подвижной фазой (82: 13: 5, ацетонитрил-метанол-вода, по об.) с расходом 0,3 мл / мин. Концентрации витамина D ₃ и внутреннего стандарта определяли по оптической плотности AUC, зарегистрированной при 265 нм.CV концентраций витамина D ₃ , определенных в добавке, содержащей витамин D ₃ , при 25 мкг / мл, составлял 2,3%. Все анализы проводились в одной партии.

25-гидроксивитамин D

Для определения оптимальных условий хранения 25-гидроксивитамина D ₃ его стабильность оценивали в течение 15 недель замораживания и 14 дней охлаждения. Для этих анализов использовали объединенную сыворотку бигля (25 мл; Innovative Research), к которой был добавлен 25 (OH) D ₃ (2,5 мкг в 0,25 мл метанола).Аликвоты 0,5 мл сыворотки хранили в холодильнике (4 ° C) и в морозильных камерах при -20 и -80 ° C. В дни 0, 2, 4, 7, 10 и 14 хранения в холодильнике и на 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недели хранения в морозильнике определяли концентрацию 25 (OH) D ₃ в дублировать аликвоты методом, описанным для анализа сыворотки 25 (OH) D ₃ . Для этого испытания 25 (OH) D ₂ (50 нг в 10 мкл метанола) использовали в качестве внутреннего стандарта вместо метки ³ H.

Статистический анализ

Статистический анализ проводился с использованием проприетарного программного обеспечения (Excel 2013, Microsoft; SAS® 9.3, SAS Institute, Inc.). Переменные наблюдения считались нормально распределенными, если вычисленное среднее и медиана отличались менее чем на 10%, статистика эксцесса и перекоса составляла от 1 до –1, а графики наблюдений стебель – лист показали несколько выбросов. Было обнаружено, что все переменные наблюдения имеют нормальное распределение, за исключением ПТГ, iCa, потребления витамина D и изменения концентрации 25 (OH) D до и после сыворотки. После преобразования журнала наблюдения PTH были нормально распределены. Для нормально распределенных наблюдений значимость различий в переменных наблюдений внутри и между контрольной и экспериментальной группами определялась с помощью парных и двухвыборочных тестов t , соответственно.Для ненормально распределенных наблюдений центральная тенденция и вариация были выражены в виде медианы и диапазона, а различия в переменных внутри и между группами были проверены на значимость с помощью знакового ранга и двухвыборочного теста Вилкоксона, соответственно. Значимость переменных корреляций проверялась с помощью корреляции Пирсона. P значения ≤ 0,05 считались значимыми.

Среднее значение и стандартное отклонение были рассчитаны для концентраций 25 (OH) D, наблюдаемых у тринадцати участвующих собак до включения в испытание добавок.Используя эти значения и размеры групп из шести и семи собак для контрольной и экспериментальной групп, соответственно, было подсчитано, что при степени β = 0,8 средняя разница в концентрациях 25 (OH) D между группами должна была бы быть равной. быть больше 25% для достижения значимости при α = 0,05.

Результаты

Обзор витамина D

Концентрация общего 25 (OH) D в сыворотке варьировала от 34,7 нг / мл до значений, превышающих линейный диапазон анализа общего 25 (OH) D> 150 нг / мл. Мы не запрашивали разведение и повторный анализ нескольких образцов сыворотки ( n 4) с концентрациями> 150 нг / мл ().Тридцать три собаки (71,7%) имели значения 25 (OH) D ниже минимальной концентрации, о которой сообщалось ранее, что указывает на достаточный статус витамина D в 100 нг / мл ⁽, 10 ⁾ . Средние значения 25 (OH) D для самок и самцов составили 82,7 (стандартное отклонение 26,0) и 83,7 (стандартное отклонение 21,5) нг / мл, соответственно, за исключением собак с концентрациями> 150 нг / мл. Концентрации 25 (OH) D существенно не различались между двумя полами.

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке у взрослых собак ( n 33) и самцов ( n 13) взрослых собак при исследовании статуса витамина D.∆ — Одна целая самка; —-, ранее сообщалось о достаточном статусе 25 (OH) D (100 нг / мл).

Испытание добавок витамина D

Средние общие концентрации 25 (OH) D для контрольной группы составляли 66 · 2 (стандартное отклонение 8 · 8) и 71 · 3 (стандартное отклонение 8 · 4) нг / мл в группе лечения до вступление в суд. Существенных различий не было обнаружено ни в контрольной, ни в экспериментальной группе для концентраций 25 (OH) D до приема добавок и на 1, 3, 6 и 9-10 неделях. Кроме того, не было обнаружено значительных различий между контрольной и экспериментальной группами до приема витамина D ₃ и через 1, 3 и 6 недель.Концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови были значительно выше ( P = 0,05) у собак, получавших лечение, по сравнению с контрольной группой на 9-10 неделе (). Однако анализ изменения концентраций 25 (OH) D в сыворотке от начала до конца испытания между двумя группами не достиг значимости. Начальная и конечная концентрации 25 (OH) D в сыворотке достоверно не коррелировали с исходными и конечными концентрациями iCa, PTH или P в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы. Хотя расчетное потребление витамина D с пищей в контрольной группе было значительно больше ( P = 0,03), чем в группе лечения, начальные концентрации 25 (OH) D в сыворотке не коррелировали в значительной степени с начальными оценками потребления витамина D ().

Общие концентрации 25-гидроксивитамина D (25 (OH) D) в сыворотке крови для контрольной (□; n 6) и лечебной (■; n 7) групп до начала испытания витамина D ₃ ( до испытания), а также на 1, 3, 6 и 9–10 неделях после начала приема добавок. Значения представляют собой средние значения со стандартными ошибками, представленными вертикальными полосами. * Среднее значение значительно отличалось от контрольной группы ( P = 0,05; двухвыборочный тест t ).

Лабораторные анализы

За некоторыми исключениями, результаты полного анализа крови и химического анализа сыворотки у собак были в пределах клинических лабораторных эталонных диапазонов (дополнительная таблица S1).Концентрации сывороточного ПТГ, iCa, P и креатинина существенно не изменились от начала до конца испытания ни в одной из групп. Не было обнаружено значительных различий для этих переменных между контрольной и экспериментальной группами до и по завершении исследования, за исключением iCa, где разница между группами до начала исследования была статистически значимой (). Начальная и конечная концентрации iCa достоверно не коррелировали с начальными и конечными концентрациями ПТГ в сыворотке ни для контрольной, ни для экспериментальной группы.

Таблица 3.

Результаты биохимических анализов сыворотки для контрольной ( n 6) и лечебной ( n 7) групп до начала и после завершения испытания добавок витамина D

(медианы и диапазоны)

Метаболиты витамина D

Экстракты образцов сыворотки, используемые для количественного определения метаболитов витамина D имели четко идентифицируемые хроматографические пики при временах удерживания стандартов для 25 (OH) D ₃ и 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ .Хроматографический пик, совпадающий со временем удерживания стандарта 25 (OH) D ₂ , не был обнаружен ни в одном экстракте. Расчетные концентрации для сыворотки 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ составляли около 40% от рассчитанных для 25 (OH) D ₃ (). Они существенно не коррелировали с концентрациями 25 (OH) D ₃ . Средняя концентрация 25 (OH) D ₃ у собак экспериментальной группы была численно выше, чем у собак контрольной группы, но эта разница не достигла значимости.Кроме того, не было обнаружено значительной разницы между концентрациями 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в двух группах.

Таблица 4.

Концентрации метаболитов витамина D в сыворотке крови в контрольной ( n 6) и экспериментальной ( n 7) группах, измеренные с помощью ВЭЖХ по завершении испытания добавок витамина D

(Средние значения и стандарт отклонения)

Анализ витамина D

Концентрация витамина D ₃ в исходной добавке, определенная количественно по завершении испытания, составила 20,7 мкг / мл, что составляет около 90% от первоначально запланированного включения.Каждая лечебная добавка, содержащая витамин D ₃ , выданная владельцам, была определена количественно по завершении испытания. Концентрации витамина D ₃ варьировались от 19,1 до 22,4 мкг / мл (в среднем 19,7 мкг / мл). Средняя измеренная концентрация (19,9 мкг / мл) представляла потерю 13% первоначального целевого включения (23 мкг / мл).

25-Hydroyxvitamin D

Концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранившихся при 4 ° C в течение 2, 4, 7, 10 и 14 дней, существенно не отличались от концентраций, определенных на день 0.Аналогичным образом, концентрации 25 (OH) D ₃ в образцах, хранящихся при -20 и -80 ° C в течение 1, 2, 3, 5, 7, 9, 12 и 15 недель, существенно не отличались от концентраций, определенных в день 0. .

Обсуждение

Наша цель по оценке эффективности перорального приема витамина D для улучшения статуса витамина D у практически здоровых взрослых собак основана на предыдущих выводах о том, что собаки с хроническими заболеваниями имеют более низкие концентрации витамина D ⁽, 10 ^, 16 ^— 19 ⁾ .Подобно исследованиям в медицине, исследователи недавнего исследования определили достаточность витамина D в большой группе взрослых собак путем оценки биомаркеров, на которые влияет статус витамина D ⁽, 10 ⁾ . Было обнаружено, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке собак при очевидном асимптотическом минимуме сывороточной концентрации ПТГ составляет 100 нг / мл. Насколько нам известно, это первый опубликованный отчет, в котором определяется достаточный уровень витамина D у взрослой собаки в поддерживающем состоянии.Хотя мы считаем, что необходимо провести много исследований, чтобы подтвердить это определение достаточности витамина D, мы также считаем, что исследования, подобные нашему, которые оценивают способы достижения концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови 100 нг / мл, являются оправданными.

Наш вывод о том, что большинство (71,7%) практически здоровых собак, которых мы оценивали, имели концентрацию 25 (OH) D в сыворотке ниже 100 нг / мл (), согласуется с результатами недавних исследований ⁽, 10 ^, 13 ⁾ . Причина этого открытия у собак неизвестна, но, вероятно, этому способствуют многие факторы, включая различия в включении витамина D в рационы и индивидуальные различия в потреблении, абсорбции и метаболизме витамина D.К сожалению, количество витамина D в рационе, необходимое для достижения определенного результата для здоровья, может быть трудно определить. Одна из причин заключается в том, что диетические анализы витамина D могут не учитывать всю активность витамина D. Например, жировая ткань и печень, которые являются обычными ингредиентами кормов для собак, могут содержать значительные количества 25 (OH) D по сравнению с витамином D ⁽, 23 ⁾ . Поскольку анализируемое содержание витамина D в корме для собак может быть предоставлено производителем по запросу; О содержании 25 (OH) D в кормах для собак обычно не сообщается, и мы подозреваем, что обычно не определяется.В настоящее время авторы исследуют, имеет ли пероральный 25 (OH) D большую эффективность в повышении статуса витамина D у собак. Было показано, что у людей проглоченный 25 (OH) D во много раз более эффективен, чем витамин D, в повышении сывороточного 25 (OH) D ⁽, 24 ⁾ .

Также проблематичными для определения достаточности включения витамина D в рацион для всех собак являются факторы, влияющие на сывороточные концентрации 25 (OH) D у собак, такие как пол (самцы> самки), репродуктивный статус (интактные> кастрированные) и порода ⁽) , 13 ⁾ .Эффект репродуктивного статуса не мог быть подтвержден в текущей исследуемой когорте, учитывая, что все собаки, кроме одной, были кастрированы. Однако это может быть одним из факторов, способствующих низкому статусу витамина D у подавляющего большинства собак, оцениваемых в этом исследовании.

Хотя считается, что концентрация 25 (OH) D в сыворотке крови указывает на статус витамина D у собак, следует отметить, что методы определения концентрации 25 (OH) D не стандартизированы, что может усложнить интерпретацию результатов ⁽ , 25 ^— 27 ⁾ .В нашем исследовании метод CLIA использовался для измерения общих концентраций 25 (OH) D, в то время как опубликованный метод ВЭЖХ ⁽, 21 ⁾ использовался для количественной оценки метаболитов витамина D, недоступных с помощью иммуноанализа. Мы обнаружили, что концентрации 25 (OH) D в сыворотке, определенные с помощью ВЭЖХ, по сравнению с концентрациями, определенными методом CLIA, используемым коммерческой лабораторией, имеют положительную корреляцию, но постоянно ниже (данные не показаны). Это методологическое различие было аналогично тому, о котором сообщили Lensmeyer и др. . ⁽, 21 ⁾ , исследователи, от которых мы адаптировали нашу методологию ВЭЖХ. Хроматографические методы, такие как HPLC и LC / MS, по сравнению с иммунологическими методами, такими как CLIA, рекламируются как более точные ⁽, 26 ⁾ .

Наиболее значимым результатом нашего исследования была лишь небольшая разница (12%) в статусе витамина D, когда собакам давали пероральную дозу витамина D, которую мы считали существенной (). В то время как значительная разница была обнаружена в концентрациях 25 (OH) D в сыворотке между контрольной и экспериментальной группами на 9-10 неделе, концентрации 25 (OH) D в сыворотке ни у одной собаки в группе лечения увеличились до сообщенных достаточных концентраций витамина D 100. нг / мл.Таким образом, наши результаты ставят под сомнение актуальность нашей добавки с витамином D ₃ для достижения конкретных результатов в отношении здоровья взрослых собак. Причина неэффективности наших добавок витамина D не была очевидна; однако были исследованы несколько возможностей объяснения результатов, которые далее обсуждаются здесь.

Для контроля переменных, которые, как сообщалось, влияют на изменения сывороточных концентраций 25 (OH) D у людей ⁽, 28 ^, 29 ⁾ , таких как возраст, пол и BW, контрольная и экспериментальная группы были сбалансированный.В среднем это не страдали ожирением собаки, и группы имели схожие состояния тела, поэтому избыток жира в организме и, следовательно, накопление витамина D ₃ в жировой ткани, вероятно, не объясняли бы слабую реакцию на добавку витамина D у наших испытуемых.

Схема лечения, использованная в этом исследовании добавок, соответствовала графику опубликованного исследования зависимости реакции от дозы на людях, которое показало почти асимптотические концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови после примерно 10 недель ежедневного перорального приема витамина D ₃ , независимо от дозы ⁽, 30 ⁾ .В этой работе на здоровых людях наибольшее повышение концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови по сравнению с исходным уровнем произошло в течение первых 3 недель приема добавок. Хотя неизвестно, реагируют ли собаки на добавки так, как это делают люди, ожидалось, что дизайн нашего исследования позволит нам зафиксировать раннее повышение 25 (OH) D в ответ на добавки. После обнаружения слабого ответа на концентрации 25 (OH) D в нашей группе лечения, испытание было завершено через 10 недель, учитывая, что у нас было маловероятно получить дальнейшие значимые результаты при сохранении этой дозы между двумя группами в этом испытании.

Чтобы оценить практические способы добавления витамина D собакам, был выбран пероральный и добровольный путь введения в пользу внутримышечного или внутривенного пути. Как жирорастворимый витамин D требует наличия жира в рационе для адекватного усвоения животным. Разумно предположить, что наличие витамина D в масляном носителе, который обычно используется в добавках витамина D для человека и вводится с едой, будет усваиваться здоровой собакой. Поскольку исследования дозировки витамина D у взрослых собак не проводились, особенно с целью улучшения статуса витамина D, выбранная дозировка добавок витамина D держалась чуть ниже рекомендованного NRC безопасного верхнего предела.Насколько нам известно, минимальная токсичная пероральная доза витамина D для взрослых собак не сообщалась, поэтому рекомендации NRC были учтены. Токсичность витамина D в рационе приводила к клиническим признакам и биохимическим нарушениям у двух взрослых собак, когда случайное избыточное потребление было примерно в 29 раз выше безопасного верхнего предела ⁽, 12 ⁾ . Исследование на щенках, получавших пищу с концентрацией, примерно в семнадцать раз превышающей безопасный верхний предел, также не привело к клиническим признакам токсичности витамина D, но серьезно нарушило эндохондральную оссификацию ⁽, 31 ⁾ .Следовательно, введенная доза витамина D ₃ , хотя и не является несущественной, не должна была вызвать токсичность.

Считается, что отсутствие добавок витамина D собаками и снижение дозировки добавок не повлияли на наши результаты. Соблюдение требований владельца оценивалось путем взвешивания добавки перед выдачей и в конце испытания, как указание на то, что добавка давалась в адекватных количествах. Владельцы не сообщали о проблемах, связанных с недостаточным потреблением собаками, когда добавка в масле применялась в корме.Кроме того, удержание витамина D ₃ в добавках, выдаваемых владельцам, по результатам измерения по завершении испытания, все еще было близко к безопасному верхнему пределу для витамина D в соответствии с NRC.

Сообщается, что концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак выше, чем у людей ⁽, 32 ⁾ и других домашних животных ⁽, 33 ⁾ . Исследование возможного метаболического превращения 25 (OH) D у собак в 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ было проведено по завершении испытания добавок.Как основной метаболит 25 (OH) D, 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ продуцируется у собак 24-гидроксилазой в почках и кишечнике ⁽, 34 ⁾ . Установлено, что концентрация 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ в сыворотке положительно коррелирует с концентрацией 25 (OH) D в сыворотке ⁽, 31 ^, 35 ⁾ . Эта корреляция была документально подтверждена в исследовании щенков, в котором сообщалось, что сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ были значительно выше в экспериментальной группе, потреблявшей в восемь раз больше диетического витамина D, чем в контрольной группе ⁽, 35 ⁾ .Эта разница в концентрациях 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ была обнаружена через 6 недель приема добавок, тогда как концентрации 25 (OH) D не различались между группами во время испытания. В настоящем исследовании сывороточные концентрации 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ у собак экспериментальной группы существенно не отличались от таковых у собак контрольной группы (). Следовательно, разумно сделать вывод, что повышенная метаболическая потеря 25 (OH) D до 24R, 25 (OH) ₂ D ₃ не объясняет слабый ответ, который произошел в нашей группе лечения на добавление витамина D.

Правдоподобным объяснением слабой реакции сыворотки 25 (OH) D на нашу добавку витамина D может быть низкая биодоступность добавки. Необходимы исследования факторов, влияющих на всасывание витамина D собаками, распределение и метаболизм абсорбированного витамина D. Сообщения о влиянии добавок-носителей на биодоступность витамина D при пероральном приеме немногочисленны ⁽, 36 ⁾ . Насколько нам известно, сравнения биодоступности витамина D между добавками и включением в рацион для собак отсутствуют.Витамин D, введенный в воротную кровь собак, эффективно удаляется печенью ⁽, 37 ⁾ . Следовательно, слабый ответ сывороточного 25 (OH) D на пероральный прием витамина D у собак может отражать внепеченочное поглощение витамина D, например, жировой тканью, и / или измененное 25-гидроксилирование витамина D печенью. Также сообщается, что в печени собак концентрации 25 (OH) D такие же высокие, как и концентрации витамина D ⁽, 38, ⁾ , а скорость 25-гидроксилирования витамина D может быть экспериментально изменена ⁽). , 39 ⁾ .

Ограничением настоящего исследования является небольшой размер выборки. Хотя дизайн нашего исследования был достаточно убедительным, чтобы показать, что к концу испытания (9-10 недели) собаки, получавшие добавку витамина D ₃ , имели более высокие концентрации 25 (OH) D по сравнению с контрольными собаками, ни одна собака в группе лечения достигла заявленной концентрации 25 (OH) D, указывающей на достаточность. Кроме того, обратная зависимость между концентрациями ПТГ и 25 (OH) D в сыворотке, которая ранее была обнаружена у собак, не была очевидна в настоящем исследовании.Вероятно, это было результатом большой межиндивидуальной дисперсии ПТГ с любой данной концентрацией 25 (OH) D в сыворотке в сочетании с небольшими размерами нашей группы, не выявившими корреляции.

В заключение, наши результаты подтверждают результаты других исследований в том, что внешне здоровые взрослые собаки значительно различаются по концентрации 25 (OH) D в сыворотке крови, показателю статуса витамина D. Мы провели проспективное испытание на собаках с концентрацией 25 (OH) D ниже 100 нг / мл, чтобы оценить эффективность пероральной дозы витамина D для улучшения их статуса витамина D.Мы обнаружили меньшую реакцию, чем ожидалось, при суточной дозе приблизительно 2 · 3 мкг / кг BW ^{0 · 75} , что существенно больше витамина D ₃ , чем количество, обеспечиваемое коммерчески доступными диетами этих собак.