+8 (916) 786-78-28 с 10.00 до 22.00 ежедневно
+8 (916) 786-78-28 с 10.00 до 22.00 ежедневно
Когда мне было 12 лет, умерла наша собака – кавказская овчарка Аза. Она была на год старше меня. Ее усыпили, потому что она мучилась от сильных болей. Я помню, как будто это было недавно – я делаю уроки, лежа на полу рядом с ней, иногда глажу и говорю с ней, когда она опять начинает скулить, даю ей таблетки, снова и снова, но они не помогают… Опухоль мы заметили, когда Азе было лет 9. Мы тут же отвели Азу в ветлечебницу, но там нам не помогли. Опухоль выросла и дала метастазы.
Сейчас есть возможность помогать таким животным. Необходимо, чтобы владельцы собак это знали. Проблема в плохой осведомленности и владельцев, и ветеринарных врачей о современных взглядах на диагностику и лечение онкологических заболеваний. Поэтому велико число запущенных случаев, когда на самом деле тяжело что-либо сделать. Тяжело и для врача, и для животного, потому что чем выше стадия болезни, тем агрессивнее лечение и хуже прогноз.
Любой ветеринарный врач в институте изучал, чем злокачественная опухоль отличается от доброкачественной, это-то ему и мешает, когда он сталкивается с опухолью молочной железы. Беру первый попавшийся учебник и читаю: «Доброкачественные опухоли имеют капсулу, при росте не инфильтрируют ткани, не дают метастазы, рецидивы, не изъязвляются, не вызывают общей реакции организма и истощения» (Практикум по общей и частной ветеринарной хирургии, 1988г). И вот, собака с единичным опухолевым узлом диаметром, например 3 см в одной молочной железе, существует давно, растет медленно, вроде как не спаяна с окружающими тканями, собака прекрасно себя чувствует. Какой диагноз поставит доктор? Доброкачественная опухоль молочной железы. Он же хорошо помнит, что написано в учебнике. Можно не волноваться. А после очередной течки опухоль увеличивается в несколько раз, воспаляется, изъязвляется, увеличиваются регионарные лимфоузлы, собака много пьет, худеет. За пару месяцев безобидная опухоль превратилась в злокачественную? В чем же дело? И что делать? Доктор говорит, что злокачественную опухоль оперировать опасно, потому что могут «пойти метастазы».
Или такой вариант: собака с единичным опухолевым узлом диаметром 5 см в одной молочной железе, существует давно, растет медленно, вроде как не спаяна с окружающими тканями, собака прекрасно себя чувствует. Доктор ставит диагноз доброкачественная опухоль молочной железы и удаляет опухоль. Иногда еще заодно и матку с яичниками удаляют, но об этом отдельно. Через пару месяцев с собакой происходит что-то непонятное – она худеет, ей плохо, потом непонятный кашель, боли, хромота или даже паралич, да еще в области операционного шва опять что-то растет и ничто не помогает, собака погибает.. Что это – рецидив? Метастазирование? Но опухоль же была доброкачественная? Подобный случай можно подробно изучить на примере статьи Елены Дубровиной «Клинический случай: Аденома поджелудочной железы у собаки». Там в самом начале подробнейшей истории болезни сказано, что недавно собаке была удалена опухоль «крайней» (??) молочной железы, и именно с этого все и началось. Почитайте, там описана типичная клиническая картина генерализации опухолевого процесса после нерадикального удаления опухоли.
А дело в том, что поведение опухоли зависит не от ее внешних признаков, а от того, из каких клеток она состоит. А как увидеть клетки? Под микроскопом. Причем смотреть в микроскоп должен специалист, видевший сотни, а лучше тысячи препаратов.
Про мастопатию и мастит у собак
Особенно запущенные случаи встречаются у животных, которых долгое время лечили от «мастопатии» и «мастита». Почему им вовремя не ставят диагноз — не понятно. Ведь у таких животных следует проявлять особую онкологическую настороженность. Также как и у животных, для которых ложная щенность и псевдолактация – обычное дело. Мастопатия на ощупь напоминает «мешочек с дробью»; мастит — это воспаление молочных желез. При обнаружении увеличивающихся узелков, «шишек», уплотнений, изъязвлений в области молочных желез в первую очередь нужно думать о новообразовании.
Небольшие узелки редко обнаруживаются владельцами, особенно у больших собак с густой шерстью, только самые внимательные их находят. И не обязательно опухолевые узлы находятся в непосредственной близости от соска или под ним, могут и между ними. Молочные железы у собак — это не несколько отдельных железок с сосками, а как бы две широкие непрерывные ленты. У шерстистых собак нередко опухоль замечают, только когда она изъязвляется. Выглядит это как гнойная рана. И собаке ставят диагноз «гнойный мастит».
Если ваша собака самка, если ей 7-8 (или больше) лет и вы обнаружили у нее растущее округлое или бугристое уплотнение в области молочных желез, или, как некоторые описывают, «на животе», почти наверняка это опухоль молочной железы. Большинство опухолей молочных желез у собак – это рак. Самый настоящий рак, какой бывает и у людей тоже, но есть и существенные отличия. И лечение в принципе такое же, как у людей – хирургическое удаление, химиотерапия, облучение. Иногда владельцы, узнав диагноз своей собачки, отказываются от лечения потому, что сравнивают тяжесть этой болезни с таковой у женщин. Это неправильно. У людей рак молочной железы гораздо злокачественнее, «злее». По данным B. Kitchel три четверти случаев опухолей молочных желез у собак не опасны и вылечиваются хирургически. Но это там, где живет B. Kitchel, а у нас положение вещей наверняка хуже из-за неосведомленности владельцев и ветеринарных врачей.
Итак, если у вашей собаки обнаружили опухоль молочной железы, вы должны знать следующее. Прежде всего, доктор должен определить стадию процесса.
Стадия зависит от:
1.Размера самого большого опухолевого узла, количество узлов не имеет значения. У собаки может быть одна опухоль диаметром 1 см, а может быть десять опухолей диаметром 1 см, на стадию и прогноз это не влияет. 2.Состояние регионарных лимфоузлов. Регионарными для молочной железы являются подмышечные и паховые лимфоузлы. Обследовать их можно пальпацией (ощупыванием). Если в них что-то пальпируется, считается, что произошло метастазирование в лимфоузлы, стадия повышается. Иногда метастазирование в лимфоузлы произошло, а прощупать это невозможно. Как быть в этом случае? Читайте дальше. 3.Наличие отдаленных метастазов. При опухолях молочных желез отдаленные метастазы в подавляющем большинстве случаев возникают в легких. Как это можно определить? Сделать снимок легких. И не такой, где даже сердца не видно, а хороший. Метастазируют не только большие опухоли, маленькие тоже. Опять же все зависит от того, из каких клеток состоит опухоль. Гораздо реже могут быть метастазы в печени — это смотрят на УЗИ. Надо сказать, что всякая пальпация печени – полная ерунда, существует только для того, чтобы произвести впечатление на владельцев. Весьма редко y собак бывают метастазы опухоли молочной железы в костях, при этом, обычно, бывает хромота или неврологические расстройства. Если таких симптомов нет, то метастазы в костях обычно не ищут. Метастазы в других органах являются казуистикой, то есть бывают очень редко.
Таким образом, если вы вызвали домой доктора, он посмотрел только на опухоль и тут же поставил какой-то диагноз и говорит о прогнозах, каких-то методах лечения, можете его не слушать. Он понятия не имеет о стадии опухолевого процесса, и поэтому не может знать как лечить вашу собаку. Я говорю не в том смысле, что он плохо учился в институте и ничего не знает и хочет угробить вашу любимицу, а в том, что у него недостаточно данных для того, чтобы поставить точный диагноз, а значит и рассуждать о вероятных методах лечения. Он должен назначить дополнительные исследования, чтобы определить стадию.
Почему важно знать стадию? Потому что от этого зависит лечение и прогноз. I и II стадии лечат хирургически и не требуется дополнительных методов (химиотерапии, облучения). При этих стадиях лимфоузлы не затронуты опухолевым процессом. То есть, если при обследовании у собаки лимфоузлы не изменены и нет метастазов в легкие, ставят I или II (в зависимости от размера самого большого опухолевого узла) стадию и собаку можно оперировать. Но я уже выше писала, что не всегда можно наощупь определить, есть ли опухолевые клетки в лимфоузлах или нет. Вот почему существуют определенные правила для операций при опухолях молочных желез. Одно из этих правил – обязательно удаляют и регионарные лимфоузлы тоже. После операции удаленную опухоль и лимфоузлы отправляют на гистологическое исследование. Гистологическое исследование подразумевает, что удаленный материал особым образом обработают, сделают срезы и посмотрят под микроскопом, из каких клеток состоит опухоль и есть ли опухолевые клетки в лимфоузлах. Опять же, нужен опытный специалист. И если в лимфоузлах эти клетки есть, то дело плохо. Это будет третья стадия, а при ней после операции нужна химиотерапия, так как считают, что раз опухолевые клетки распространились в лимфоузлы, то нет никакой гарантии, что они не распространились и дальше. А в этом случае, чтобы продлить жизнь животному, нужна химиотерапия. То есть стадия обязательно требует уточнения и после операции.
Опухоль может быть маленькая, но уже метастазировать в лимфоузлы и тогда стадия будет тоже III и понадобится химиотерапия. К IV стадии относятся опухоли любого размера, метастазировавшие в легкие. При этих стадиях только хирургическое лечение не поможет, а может даже навредить. Вот почему такие разноречивые данные об успешности лечения опухолей молочных желез у собак. О распространенности процесса ничего не известно, а лечат хирургически. Если через 2 месяца после операции собака погибает от метастазов, то это значит, что во время предоперационного обследования их просто не обнаружили, и такую собаку вообще не следовало оперировать или операцию сделали нерадикально. Вот откуда миф о том, что лечить рак молочных желез бесполезно и лучше собаку усыпить, «когда она начнет страдать».
О радикальности операции
Еще о правилах, которые обязательно должны соблюдаться при операциях по поводу опухолей молочных желез. Метастазирование идет по лимфатическим сосудам, поэтому нужно учитывать особенности лимфооттока из молчных желез. Из первых трех желез (считают от головы) лимфоотток (а потому и метастазирование) происходит в подмышечные лимфоузлы, а из последних трех – в паховые. Деление первая, вторая, третья и т.д условно, молчные железы – две непрерывные ленты. Таким образом, лимфоотток из третьей молочной железы смешанный, опухолевые клетки имеют возможность распространяться «и вперед, и назад».
Например, опухоль находится в четвертой и пятой (у большинства собак это соответственно предпоследняя и последняя) молочной железе. Необходимо удалить три последние молочные железы вместе с паховыми лимфоузлами. Если удалить только опухоль, где гарантия, что опухолевые клетки уже не распространились в соседние ткани молочной железы и в лимфоузлы? Такую операцию нельзя считать радикальной. Если опухоль находится в первой или второй молочной железе, удаляют первые три железы вместе с подмышечными лимфоузлами. А если опухоль в третьей железе – необходимо удалить всю гряду молочных желез с паховыми и подмышечными железами.
Вы можете привести мне в пример соседскую собаку Дину, которой не делали никаких там обследований и снимков, а просто удалили опухоль, и она до сих пор жива. Что ж, бывает. Я рада за Дину. Это как лотерея, можно и выиграть. Но тех, которые не выиграли, уже нет.
Мастэктомия операция не ерундовая и требует помимо определенных знаний и навыков хирурга, еще и адекватного анестезиологического пособия и послеоперационной реабилитации. Поскольку заболеванию подвержены немолодые животные, у которых могут быть хронические заболевания сердечно-сосудистой системы, печени, почек и других органов, чтобы не получить их обострения, необходимо предоперационное обследование и при необходимости специальная подготовка к операции. Все это не просто. И мало знать об этом теоретически. Нужен опыт. И нет ничего удивительного, что ваш любимый ветеринар Иван Иванович Иванов, который так виртуозно купирует ушки, делает кесарево и мастерски лечит все что угодно, разведет руками, обнаружив опухоль молочной железы. Пусть он лучше ими разведет, чем что-то сделает на авось. «Не навреди» — это и к ветврачам относится. Больно смотреть на животных с рецидивами, с которыми обращаются после нерадикального удаления опухоли. И это в Москве, где полно клиник, способных оказать квалифицированную помощь.
По поводу удаления матки и яичников
Часто приходится слышать, что бесполезно удалять опухоль молочной железы без одномоментной стерилизации животного. А то, что опухоли возникают и у стерилизованных животных, как объяснить? Снижает риск возникновения опухолей молочных желез только стерилизация до первой течки. Значительно снижает риск, но не исключает возможности заболевания. Только небольшая часть опухолей гормонозависима. Такие исследования проводили и они показали, что только небольшая часть опухолей содержит рецепторы к гормонам. То есть, удалили опухоль, стерилизовали, а опухоли в оставшихся молочных железах все равно появляются. Зачем тогда стерилизовали? А еще бывает, стерилизуют, а опухоль оставляют. Так вот — она никуда не денется, и даже расти не перестанет. Стерилизация – полостная операция, вместе с удалением опухоли молочной железы – тяжелое вмешательство, тем более для пожилого животного. А если опухоль удалили нерадикально и не обнаружили метастазы, никакая стерилизация не спасет от генерализации процесса. Кстати, опухоли молочных желез встречаются и у самцов.
Как ни странно, иногда встречаются люди, которые вообще не знают, что такое рак. Я не имею в виду какие-то специфические знания, а просто понятия – онкология, рак, химиотерапия им незнакомы. Не знают, что лекарства от рака еще не придумали. Взрослые, образованные люди, живущие не в глухой деревне, а в цивилизованном обществе и требуют стопроцентной гарантии при лечении онкологического заболевания. Почему нельзя гарантировать полное выздоровление при даже небольшой опухоли молочной железы? Посудите сами. Пусть у собаки малюсенькая опухоль молочной железы без метастазов в лимфоузлы и легкие, сделана операция по всем правилам, проведено гистологическое исследование удаленной опухоли и лимфоузлов, диагноз – тубулярный рак молочной железы, I стадия. Примерно с 95% вероятностью можно сказать, что такая собака доживет спокойно и счастливо до глубокой старости и не вспомнит, что у нее был когда-то рак. Но остаются 5% неблагоприятных исходов, и нет гарантии, что именно вашей собаке не повезет. То есть из 100 собак полностью выздоровеют 95, а у 5 собак все таки возникнут проблемы. (95 и 5% — это не данные статистики, а очень приблизительные цифры) И это при I и II стадиях, что уж говорить про последующие, где речь идет не про излечение, а про продление жизни. Я думаю, что даже когда придумают лекарство от рака, не будет 100% излечиваемости. Это же рак! Помните, что до сих пор люди иногда умирают от аппендицита и даже гриппа. Нужно иметь представление о таких вещах. Я недавно прочла совершенно справедливые слова одного доктора о том, что в школе детям почему-то усиленно вдалбливают всякие синусы-косинусы интегралы, французские революции и ботанику, а основы медицины почему-то не преподают. А ведь с болезнями и с медициной каждый будет иметь дело обязательно.
Я надеюсь, что если вдруг у вас случится беда и ваша собака заболеет этим неприятным заболеванием, моя статья поможет вам избежать участи тех, кто попал в руки неосведомленных в вопросах онкологии ветеринарных врачей и упустил время. Конечно, если есть возможность, надо лечить животное в специализированном учреждении, где есть все средства диагностики, необходимое оборудование и специалисты.
Анна Дубова, ветеринарный врач
Каждая четвертая собака страдает раком, а в возрастной группе старше 10 рак убивает половину питомцев. Практикующие ветеринары, сознательно или нет, почти ежедневно имеют дело с больными раком. Ранняя постановка диагноза, лечение опухоли молочной железы у собаки, дает возможность провести соответствующие процедуры, направленные на излечение пациента или продление его жизни.
Новообразования часто встречаются у поздно стерилизованных сук. Половина случаев являются злокачественными, а половина последних метастазирует в окружающие лимфатические узлы, легкие.
Классификация:
Растущая раковая опухоль может вызвать:
Даже небольшие узелки в центральной нервной системе могут быть связаны с развитием неврологических расстройств (эпилепсия, изменения поведения), не откладывайте лечение опухоли молочных желез у собак.
Необходимо провести удаление опухоли молочных желез у собак. Решение не следует откладывать, так как эти новообразования отличаются быстрым ростом и сильными метастазами.
Хирург при опухоли молочной железы у собаки перед операцией подберет подходящий метод в зависимости от размера и степени образования.
Возможно удаление опухоли молочной железы у собак:
Фомичева Дарья Владимировна
терапевт, онколог
По статистике, опухоли молочных желез составляют около 50% всех онкологических заболеваний у собак.
В основном этому заболеванию подвержены самки, но в 1% случаев его обнаруживают и у самцов. Чаще всего опухоль молочной железы появляется у животных в возрасте 10—11 лет, иногда раньше. У животных моложе 4 лет это заболевание встречается редко.
Опухоль молочной железы можно описать как ненормальное разрастание ткани железы, не контролируемое организмом. Опухоль состоит из атипичных клеток, то есть клеток неправильного строения, отличающихся от клеток нормальной ткани и по строению, и по функции.
Клетки опухоли активно делятся и передают свои неправильные свойства потомкам. Процесс деления клеток может продолжаться практически бесконечно, что и вызывает разрастание опухолевой ткани. Механизмы возникновения и развития опухолей изучены к настоящему времени довольно подробно, однако полного представления об этом все еще нет.
Опухоль без каких-либо клинических проявлений, как правило, развивается в течение достаточно длительного времени – до нескольких лет. Скорость роста каждой конкретной опухоли индивидуальна, поэтому прогноз у каждого пациента всегда носит приблизительный характер.
Опухоли принято делить на доброкачественные и злокачественные. Среди всех опухолей молочной железы собак злокачественные составляют 41-53%. Наиболее часто встречающийся тип злокачественных опухолей – рак молочной железы.
Отличительной особенностью злокачественных опухолей является их способность к метастазированию, то есть к распространению клеток опухоли по организму с током крови, лимфы или контактно. Распространившиеся клетки при определенных условиях дают начало новым таким же опухолям в других органах, – опухоль прогрессирует.
Опухоли молочной железы чаще всего начинают метастазировать по лимфатическим сосудам, и только потом по кровеносным. Поэтому первым признаком прогрессирования опухоли молочной железы является возникновение метастазов в регионарных, то есть ближайших к опухоли, лимфатических узлах (у собак это подмышечные и паховые лимфатические узлы).
Для отдаленных метастазов наиболее вероятной областью распространения являются легкие, но возможно метастазирование и в другие органы: печень, поджелудочную железу, почки, селезенку, кости.
Разделение опухолей на доброкачественные и злокачественные условно, так как любая доброкачественная опухоль может под воздействием каких-либо канцерогенных факторов превратиться в злокачественную.
Лечение
Результативное лечение опухолей молочной железы, в том числе и злокачественных, сегодня возможно. Однако эффективность лечения напрямую связана со стадией, на которой опухоль выявлена, и с типом опухоли. Понятие «стадия» отражает степень распространенности опухоли по организму животного: чем обширней распространена опухоль, тем выше стадия. Стадия обычно определяется при проведении комплексного обследования животного и иногда выясняется окончательно лишь после гистологического исследования удаленной опухоли и регионарных лимфатических узлов. Чем выше оказывается стадия опухоли, тем хуже прогноз и меньше возможностей эффективного лечения.
Выявление злокачественных опухолей на ранней стадии затрудняется тем, что основное время их развития протекает бессимптомно. Тем не менее, если опухоль с уже проявившимися симптомами обнаруживается достаточно рано, эффективное лечение все еще бывает возможно. Поэтому очень важно, чтобы владельцы регулярно обследовали своих животных.
У собак имеется пять (иногда больше) пар молочных желез. Они расположены на нижней стороне грудной клетки и на животе, от уровня передних лап и до паха. Опухоль молочной железы чаще всего выглядит как одно или несколько узловых уплотнений, то есть уплотнений с довольно четкими границами. Рост опухоли может сопровождаться ее фиксацией к грудной или брюшной стенке, покраснением и изъязвлением кожи в результате разрушения части ткани опухоли. Нарушение оттока лимфы от молочных желез самой опухолью или ее метастазами может привести к отеку соответствующей конечности.
В редких случаях опухоль молочной железы может протекать и в диффузной форме. В этом случае в молочной железе выявляется уплотнение без четких границ, иногда болезненное, покрасневшее, с местным повышением температуры. Обычно такая опухоль за короткое время распространяется по всему организму. Часто данный тип опухоли трудно отличить от заболевания воспалительной природы – мастита.
Если вы заподозрили у вашей собаки опухоль молочной железы, необходимо показать ее врачу.
Если присутствие опухоли подтверждается, врач определяет стадию заболевания по размеру опухолевых узлов, на основании данных о вовлечении в процесс окружающих тканей, по подозрению на поражение регионарных лимфатических узлов и наличию отдаленных метастазов. Метастазы в легких выявляются с помощью рентгенографии грудной клетки. При подозрении на распространение процесса в брюшной полости проводят УЗИ (ультразвуковое исследование). Если заболевание сопровождается хромотой, то проводят рентгенографическое исследование конечности на предмет метастатического поражения костной ткани.
После установления стадии врач рекомендует соответствующее лечение. На первых стадиях опухоли молочной железы обычным методом лечения является операция под названием мастэктомия — удаление молочной железы. При проведении этой операции используют принцип радикализма, то есть удаляют не только саму опухоль, но и все пораженные молочные железы, а также часть окружающих тканей и регионарные лимфатические узлы, в которые с током лимфы могли попасть опухолевые клетки.
Перед назначением операции врач выполняет дополнительное обследование, чтобы определить, операбелен ли пациент (операбельность – состояние, позволяющее провести хирургическое лечение), и выявить наличие вероятных сопутствующих хронических патологий.
После проведения операции удаленные ткани отправляют на гистологическое исследование. В специальной лаборатории гистолог определяет тип клеток, из которых состоит опухоль, и наличие поражения опухолевыми клетками регионарных лимфатических узлов. Если поражение лимфоузлов подтверждается, это означает, что клетки опухоли уже начали распространяться по всему организму, и заболевание имеет высокую стадию. В таком случае назначают системное лечение (химиотерапию) для подавления роста оставшихся в организме опухолевых клеток.
На последней стадии рака молочной железы, при наличии отдаленных метастазов, вылечить собаку невозможно, можно только попытаться улучшить качество жизни (паллиативное лечение) и провести симптоматическое лечение (антибактериальная, противовоспалительная, обезболивающая терапия и др.).
Некоторые врачи рекомендуют одновременно с мастэктомией, или даже вместо нее, проводить овариоэктомию — удаление яичников, однако, эффективность такого метода лечения не доказана. Лечение опухолей молочной железы, по аналогии с человеческим раком, с помощью гормонотерапии (препаратом «Тамоксифен») не нашло применения в ветеринарии; по данным иностранных авторов, влияние подобных препаратов неоднозначно и требуются дальнейшие исследования.
Существуют данные, что риск развития злокачественных опухолей молочной железы у собак снижается при проведении ранней стерилизации. Так, стерилизация до первой течки снижает риск до 0,05%, после первой течки — до 8%, после второй — до 26%. Стерилизация, проведенная в возрасте 2,5 года или позже, уже не влияет на развитие опухолей молочных желез.
Таким образом, профилактикой опухолей молочной железы является ранняя (до первой течки) стерилизация животных, не участвующих в воспроизводстве. Владельцам некастрированных собак рекомендуется регулярно проводить осмотр и пальпацию молочных желез животных, особенно в течение первых двух-трех месяцев после течки, так как в этот период молочные железы особенно склонны к воспалению и пролиферативным процессам (размножение клеток). При обнаружении у собаки, особенно в возрасте после 7 лет, узлового уплотнения в области молочных желез, необходимо обратиться к врачу.
Мастит — это острое или хроническое воспаление молочной железы. Чаще всего маститы у собак регистрируются в послеродовом периоде или же при наличии ложной беременности, когда молочные железы собаки усиленно секретируют молоко. Из микробной ассоциации основным возбудителем мастита являются стафилококки и стрептококки.
Непосредственной причиной возникновения мастита у собак являются:
Мастит у собак может возникнуть от высоких и низких температур, воздействие на молочную железу химических веществ, в результате перенесенного стресса. Большую роль в возникновение маститов у собак играет наследственная предрасположенность к данному заболеванию.
Воспалительный процесс в молочной железе у собак чаще всего протекает в форме катарального или гнойного мастита, вовлекая в процесс один или несколько пакетов молочной железы.
Симптомы. У заболевшей собаки отмечаем вялость, снижение или отсутствие аппетита. Пораженные пакеты молочных желез визуально увеличены в размере, при пальпации плотные, болезненные и горячие на ощупь, кожа их покрасневшая (если кожа не пигментирована). При надавливание на соски, из них выделяется при катаральном мастите водянистое молоко с примесью зеленовато-бурых или серо-белых хлопьев. При гнойном мастите —небольшое количество, иногда несколько капель желтоватой или желтовато-коричневой жидкости или густой массы серого цвета, нередко с примесью крови. При отсутствие своевременной квалифицированной ветеринарной помощи катаральный и гнойный мастит может перейти в абсцесс, при котором абсцессы самопроизвольно вскрываются и из образовавшегося свища выделяется гнойное содержимое темно-серого цвета с обрывками некротизированных тканей, а в последствии во флегмону и гангрену вымени.
Лечение. Больной собаке предоставляем полный покой. Если она в этот период кормит щенков, то их необходимо перевести на искусственное вскармливание. В начальной стадии болезни применяем консервативные методы лечения. В начальной стадии мастита хорошие результаты получаем от применения лазерных аппаратов различных модификаций, применяя СТП в течение 1,5-2,5минут. Курс лечения состоит из 2-5 сеансов. Применяем антибиотики от пенициллинов до современных цефалоспоринов и хинолонов. Идеально было бы предварительно в ветеринарной лаборатории провести подтитровку возбудителя мастита выделенного из воспалительного секрета молочной железы к антибиотикам и в дальнейшем проводить лечение подтитрованным антибиотиком.
Неплохие результаты в начальных стадиях развития катарального и гнойного маститов получают от применения короткой новокаиновой блокады пораженных пакетов 0,5%-ным раствором новокаина в дозе 5-20мл в соединительное пространство между основанием каждого больного пакета железы и брюшной стенкой. Блокаду в случае необходимости можно через 1-3дня повторить. При амбулаторном посещение ветеринарной клиники ее можно делать 1раз в 3дня, применяя в качестве антибиотика бициллин- 3 в дозе 15 000-20 000 Е.Д. на 1кг массы тела собаки.
В стадии разрешения воспалительного процесса местно применяют тепловые процедуры- грелки, припарки, согревающие компрессы, парафиновые аппликации, облучение лампой солюкс. Хороший эффект наступает от применения озокерита, обеспечивающего глубокое прогревание тканей. Не рекомендуется назначать компрессы и припарки при абсцессах молочной железы т.к. в результате пассивной гиперемии наблюдается ухудшение кровоснабжения и может возникнуть опасность вскрытия абсцесса с последующим прорывом гноя в здоровые прилегающие ткани.
Сейчас нашло широкое применение нового современного лекарственного препарата МАСТОМЕТРИНА восстанавливающего функцию эндометрия и молочной железы и оказывающего противовоспалительное действие, применяя 1раз в сутки можно совместно с травматином (можно в одном шприце) внутримышечно или подкожно в дозе 1-2мл. Курс лечения 3-5иньекций.
При отсутствии положительных результатов от консервативного способа лечения на протяжении нескольких дней, необходимо прибегнуть к хирургическому вмешательств из за наличия множества мелких абсцессов с густым гноем в толще нерассасывающегося уплотнения. Созревшие абсцессы вскрываем, гнойные полости присыпаем порошком стрептоцида, трициллина и других антимикробных средств и в дальнейшем лечим антимикробными мазями и эмульсиями.
Профилактика. Заключается в соблюдении владельцами собак зоогигиенических условий их содержания, полноценного кормления, надлежащего ухода за ними, недопущения травмирования, переохлаждения и загрязнения вымени. Владельцы собак должны предупреждать и своевременно лечить послеродовые осложнения и заболевания органов пищеварения.
Если владельцы собаку содержат на улице, во дворе, то будку необходимо устраивать так, чтобы ее можно было легко дезинфицировать и как можно чаще менять подстилку. В зимнее время на лежанке перед будкой не должно быть льда, лаз в будку закрываем занавеской из брезента или мешковиной.
При содержании собаки в квартире ей отводим определенное место. Собаку нельзя размещать на кухне, в туалетной комнате, а также вблизи двери. Для отдыха собаке стелют коврик, который владельцы собаки должны ежедневно чистить пылесосом или выколачивать во дворе. Раз в неделю коврик кипятят. Волосяные матрасы, тюфяки, набитые соломой, сеном или стружками малопригодны в качестве подстилки, так как их трудно содержать в чистоте.
Владельцы собаки должны содержать в чистоте не только место для животных, но и тело собаки. Для этого собаку ежедневно чистят с помощью щетки, гребня, фланели или суконки, раз в 1-1,5 месяца моем теплой водой с шампунью. Смотрите статью «Уход за собакой» и «Уход за шерстью».
Для щенения собаке, содержащейся в квартире оборудуют место в виде ящика с подстилкой. Чтобы собака не поранила соски вымени при выходе из ящика, одну сторону его делаем невысокой, покрытой материей. У длинношерстных пород собак вокруг сосков выстригают волосы.
После того как роды прошли из гнезда убираем сырую загрязненную подстилку, загрязненную подстилку заменяем чистой.
У ощенившейся собаки теплой водой или слабым раствором марганцовокислого калия обмываем задние конечности, живот, хвост, после чего насухо вытираем чистой салфеткой. В дальнейшем на протяжении всего подсосного периода следят за чистотой гнезда и тела собаки.
Одним из главных условий в профилактике мастита у собак является организация правильного, полноценного кормления лактирующих сук, что способствует образованию молока в достаточном количестве. Смотрите статью «Основы кормления собаки» и «Кормление лактирующей собаки» Если у собаки мало молока, то щенки постоянно беспокоятся, раздражают и травмируют кожу вымени, что может привести к возникновению мастита. Владельцы собак маломолочным самкам должны увеличит в рационе количество кормов животного происхождения (молока и мяса). Если у собаки образуется недостаточное количество молока, а приплод большой, то владельцы должны как можно раньше приступить к подкормке щенков или лишних щенков подсаживать для вскармливания другой суке. Смотрите статью «Кормление щенков».
Чтобы не было маститов травматического происхождения у щенков на 8-10день после рождения, а затем каждые две недели обрезаем ножницами острые концы коготков на передних лапах, чтобы они не царапали кожу молочной железы. При обнаружении на коже вымени ранок, царапин, их следует своевременно обрабатывать (5%-ной настойкой йода, зеленкой и т.д.).
Своевременное оказание лечебной помощи при заболеваниях послеродового периода (задержание последа, послеродовый эндометрит), патологических родах, а также заболеваниях органов пищеварения.
Для профилактики мастита регулярно проводят осмотр лактирующих сук, проводят массаж сосков, так как уплотнения, оставшиеся после мастита, впоследствии могут спровоцировать опухоли молочных желез.
В тех случаях, когда у собаки наступает гибель приплода, а также при ложной беременности, с целью уменьшения образования молока владельцы собаки должны ограничить кормление самки, исключить из рациона корма животного происхождения (молоко, молочные продукты, уменьшаем норму мяса) и дачу воды.
В тех случаях, когда владельцу помет нежелателен, под самкой оставляем с профилактической целью 1-2щенков. В том случае если все щенки погибли, молочные железы у собаки смазываем камфорным маслом и туго забинтовываем.
Если владелец не планирует вязку собаки, то ее лучше стерилизовать. Эта операция проводится до первой течки (в возрасте 8-10 мес.) или через 2 месяца пос
Молочные железы расположены на животе у собак. Их, обычно, 10 штук в два ряда по 5 штук. В норме, у собаки, которая не кормит щенков и не беременна, железы не должны иметь никаких утолщений, отеков, выделений и гиперемии (покраснения). У беременных животных в норме может наблюдаться небольшое набухание желез. Но если владелец замечает, что молочные железы у его питомца изменили форму, цвет, отвердели или из них появились выделения – необходимо обследовать животное в ветеринарной клинике для выяснения причины такой патологии.
В зависимости от возраста собаки, ее физиологического состояния, можно выделить несколько основных причин набухания молочных желез у животного.
В качестве диагностики ветеринарный врач может взять материал, выделяемый из молочной железы, на цитологический анализ. Такой анализ покажет наличие воспаления в железе и определяет чувствительность инфекции к определенным типам антибиотиков.
При подозрении на опухоль молочной железы, животному обязательно делается рентгеновский снимок грудой клетки для исключения метастаз в легких, и сдаются клинический и полный биохимический анализы крови. Далее собака направляется на операцию по удалению молочных желез – мастэктомию. После операции удаленный материал обязательно исследуются на наличие и тип опухолевого процесса для определения необходимости и выбора дальнейшего лечения (например, химиотерапии).
В зависимости от причины, вызывающей отек молочных желез у собаки, может быть использовано следующее лечение.
Ветеринарные врачи рекомендуют стерилизовать собак, которых не планируется использовать в разведении. Эта процедура существенно снизит риск галактореи и опухолей молочных желез у собаки.
У собаки, которая кормит щенков, следует проверять молочные железы на наполненность и плотность. Если после кормления остается много молока – его рекомендуется сцеживать вручную или подсаживать щенков к тем железам, которые не полностью опустошаются. А если наблюдается еще и уплотнение молочных желез, болезненность и покраснения – то это повод обратиться к ветеринарному специалисту.
Опухоли молочных желез у собак и кошек
Факторы риска:
Заболеваемость и распространенность:
Признаки и симптомы:
Варианты лечения:
Диагностические тесты: Для кошек и собак с опухолями молочной железы рекомендуется физикальное обследование, анализы крови (общий анализ крови и биохимия сыворотки), УЗИ брюшной полости и рентгенограммы грудной клетки.
«Тонкоигольный аспират не позволяет отличить доброкачественные опухоли от злокачественных и, следовательно, выполняется не часто. ».
Дифференциальная диагностика
Осложнения: Осложнения, связанные с заболеванием, можно разделить на местные и метастатические категории.
Хирургические варианты:
Осложнения хирургии:
Последующий уход:
Прогноз:
Профилактика:
|
Большинство домашних животных выписываются через 1–5 дней после операции, в зависимости от степени перенесенной операции и степени комфорта. Обычно их возвращают для повторной проверки и снятия кожных швов или скоб (если есть). Боль можно хорошо контролировать с помощью лекарств, назначаемых владельцем. Болевые пятна могут прилипать к коже. Некоторым пациентам могут быть отправлены антибиотики домой.
Обычно ограничения после операции:
Послеоперационные осложнения могут включать:
Если опухоль молочной железы злокачественная, хирургическое место и регионарные лимфатические узлы следует проверять на наличие местного рецидива и метастазов опухоли, соответственно, каждые 3 месяца в течение первых 12 месяцев после операции, а затем каждые 6 месяцев после операции. УЗИ брюшной полости и рентгенограммы грудной клетки также рекомендуются каждые 3–6 месяцев для оценки признаков метастазирования.
У собак существует ряд факторов, которые влияют на прогноз после операции. Эти прогностические факторы включают размер опухоли, клиническую стадию (степень распространения рака в организме), тип и степень опухоли, а также различные другие патологические изменения, наблюдаемые в опухолевой ткани. Доброкачественные опухоли излечиваются хирургическим путем, хотя возможно развитие новых опухолей молочной железы (как доброкачественных, так и злокачественных).При злокачественных опухолях молочной железы прогноз хуже на , и это также зависит от типа рака. У собак размер злокачественных опухолей молочной железы является важным фактором при определении прогноза как в отношении местного рецидива опухоли, так и времени выживания. Чем меньше масса во время операции (3-5 см или меньше), тем меньше вероятность ее повторения или метастазирования (распространения) в другом месте. Собаки могут жить несколько лет после полного удаления некоторых злокачественных опухолей молочной железы. Итак, как только новообразование обнаружено, лучше провести операцию по его удалению раньше.
Прогноз для кошек с опухолями молочной железы осторожен, поскольку опухоли молочной железы имеют тенденцию быть более агрессивными и метастатическими у кошек. Многие прогностические факторы, используемые у собак, также применимы к кошкам, хотя объем хирургического вмешательства также важен для кошек. Когда опухоль меньше (менее 3 см), после ее удаления кошки могут жить пару лет; если он больше 3 см, прогноз для жизни после операции составляет 4–12 месяцев. Поэтому важно раннее хирургическое лечение. У кошек количество окружающих тканей, удаленных вместе с образованием, также может повлиять на их продолжительность жизни после операции.В некоторых случаях время выживания после операции было утроено у пациентов, подвергшихся агрессивному хирургическому лечению [пациенты с большими резекциями жили 3 года, а те, кто лечился только с удалением опухоли с тем же типом опухоли, жили 1 год]
Опухоли молочной железы можно в значительной степени предотвратить, стерилизуя их до 6-месячного возраста или до первого цикла течки вашего питомца. К другим факторам, которые могут снизить частоту опухолей молочной железы, относятся сбалансированное питание, отказ от ожирения и прием гормонов (особенно прогестерона или смешанных эстроген-прогестероновых препаратов).
Опухоль молочной железы — это опухоль, происходящая из молочной железы. Это обычная находка у пожилых самок, которые не стерилизованы (уровень заболеваемости составляет одну из 4 среди неоплаченных самок старше 4 лет), но они также встречаются и у других животных. Молочные железы у собак связаны с их сосками и простираются от нижней части груди до паха по обе стороны от средней линии. Существует много различий между опухолями молочной железы у животных и раком груди у человека, включая тип опухоли, злокачественность и варианты лечения.
Опухоли молочной железы могут быть небольшими простыми узелками или большими агрессивными метастатическими разрастаниями.При раннем обнаружении и своевременном лечении даже некоторые из наиболее серьезных опухолей можно успешно лечить.
Есть несколько типов опухолей молочной железы у собак. Приблизительно 50% всех опухолей молочной железы у собак являются доброкачественными, а остальные 50% злокачественными. Наиболее распространенная доброкачественная форма опухолей молочной железы собак представляет собой смесь нескольких различных типов клеток. Наличие в одной опухоли более одного вида раковых клеток для многих видов на самом деле является редкостью. Этот комбинированный рак у собак называется «доброкачественной смешанной опухолью молочной железы» и включает в себя железистую и соединительную ткань.Другие доброкачественные опухоли включают сложные аденомы, фиброаденомы, протоковые папилломы и простые аденомы.
Злокачественные опухоли молочной железы включают: канальцевых аденокарцином, папиллярных аденокарцином, папиллярно-кистозных аденокарцином, солидных карцином, анапластических карцином, остеосарком, фибросарком и злокачественных смешанных опухолей.
Развитие доброкачественных опухолей молочной железы, а не злокачественных опухолей, было связано с женским репродуктивным гормоном прогестероном.Однако, несмотря на это, стерилизация женщины в возрасте до 2-1 / 2 лет значительно снижает риск как доброкачественных, так и злокачественных опухолей молочной железы. Стерилизация по истечении этого времени снижает риск доброкачественных опухолей, но, по-видимому, не имеет преимуществ для предотвращения злокачественных опухолей. Эти результаты указывают на то, что гормоны не оказывают прямого мутагенного действия на клетки молочной железы. Скорее, считается, что гормоны, стимулируя рост клеток, увеличивают количество клеток, которые могут быть подвержены злокачественной трансформации.Это согласуется с выводом о том, что доброкачественные новообразования могут становиться злокачественными. Таким образом, ранняя стерилизация может уменьшить возникновение злокачественных новообразований, поскольку процедура удаляет источник гормонов, которые заставляют некоторые клетки молочной железы терять контроль над ростом, что подвергает эти делящиеся клетки высокому риску мутации и злокачественной трансформации канцерогенами окружающей среды. отчеты идентифицировали активацию специфического онкогена в ряде опухолей молочной железы собак.Интересно, что беременность и кормление грудью, по-видимому, не влияют на риск рака молочной железы, однако данные свидетельствуют о том, что у самок, активно размножающихся с раннего возраста, риск рака молочной железы немного ниже.
Примерно 50% злокачественных опухолей молочной железы у собак имеют рецепторы либо к эстрогену, либо к прогестерону. Это означает, что присутствие этих женских гормонов способствует росту этих опухолей. Доброкачественные опухоли также имеют рецепторы женских гормонов и могут также стимулироваться гормональным циклом самки собаки.Это означает, что стерилизация важна, даже если опухоль уже образовалась; В одном исследовании суки собак, стерилизованные во время удаления опухоли молочной железы или за два года до этого, жили на 45% дольше, чем те, у кого не было стерилизации.
Есть несколько видов рака, которые так легко предотвратить, как рак молочной железы у собак.
Риск рака груди практически исключен у собак, стерилизованных перед первой течкой. Риск злокачественных опухолей молочной железы у собак, стерилизованных после первой охоты, значительно увеличивается, но если владелец ждет, чтобы стерилизовать свою собаку до окончания второй охоты, риск возрастает до 25%.Считается, что устранение или уменьшение определенных гормональных факторов вызывает снижение заболеваемости у стерилизованных собак. Этими факторами, скорее всего, являются эстроген, прогестерон, аналогичный гормон или, возможно, комбинация двух или более из них.
Беременность и лактация, по-видимому, не влияют на риск рака молочной железы, однако данные свидетельствуют о том, что у самок, активно размножающихся в раннем возрасте, риск рака молочной железы несколько ниже.
Опухоли молочной железы чаще всего встречаются у не стерилизованных сучек среднего возраста в возрасте от 5 до 10 лет.Однако в редких случаях они также могут быть обнаружены у неоплачиваемых собак в возрасте от 2 лет. Эти опухоли крайне необычны у собак, стерилизованных в возрасте до 2 лет. Иногда у кобелей развиваются опухоли молочной железы, обычно они очень агрессивны и имеют плохой прогноз.
Породы повышенного риска включают: пудель, бриттани-спаниель, английский сеттер, пойнтер, фокстерьер, бостон-терьер, кокер-спаниель.
Ранняя стерилизация по-прежнему остается одной из лучших вещей, которые владельцы домашних животных могут сделать для улучшения здоровья и обеспечения долгой жизни своих собак.
Опухоли молочной железы представляют собой единичную опухоль, твердую массу или несколько опухолей в ткани молочной железы. Их обычно легко обнаружить, осторожно пальпируя молочные железы. Доброкачественные наросты часто бывают гладкими, небольшими и медленно растут. По сравнению с доброкачественными новообразованиями злокачественные новообразования могут быстро разрастаться, иметь неправильную форму, ощущаться «прикрепленными» к коже или подлежащей ткани и / или становиться изъязвленными. Иногда опухоли, которые были маленькими в течение длительного периода времени, могут внезапно быстро и агрессивно расти, но это не обычное развитие.
У суки обычно 8-10 молочных желез, каждая со своим соском. Рак молочной железы может возникать и возникает в любой или всех железах, но обычно возникает в железах, расположенных ближе всего к задним ногам. В 50% случаев наблюдается более одного роста.
Злокачественные опухоли могут возникать одновременно с маститом у кормящих женщин и проявляться, когда симптомы мастита устраняются с помощью антибиотиков. Воспалительная карцинома, чрезвычайно агрессивная форма рака молочной железы, похожа на мастит по внешнему виду, но ее следует немедленно заподозрить, когда ее симптомы проявляются у нелактирующей женщины.Этот рак представляет собой массу, которая может поражать несколько или цепь молочных желез. Пораженная область кажется красной, опухшей и теплой на ощупь. Фактически, прикосновение к этой области вызывает явный дискомфорт для женщины.
По внешнему виду очень сложно определить тип опухоли. Биопсия или удаление опухоли и анализ почти всегда необходимы, чтобы определить, является ли опухоль доброкачественной или злокачественной, а также определить ее тип. Аспирация через иглу может быть использована для предварительной диагностики болезни.Процедура предполагает забор некоторых клеток с помощью шприца. Клетки отправляются в лабораторию, которая может определить, является ли опухоль доброкачественной или злокачественной, с достаточной точностью, чтобы определить, насколько агрессивным должен быть хирургический подход. Аспирация иглой может быть полезной предоперационной процедурой во многих случаях, но в конечном итоге биопсия является тем, что требуется для определения степени заболевания.
Более агрессивные опухоли могут метастазировать и распространяться на окружающие лимфатические узлы или легкие.Рентген грудной клетки, УЗИ брюшной полости и физический осмотр лимфатических узлов часто помогают в определении этого. Кроме того, для оценки функции внутренних органов, вероятно, будет назначен сравнительный подсчет клеток крови, химический профиль и анализ мочи.
Собакам с доброкачественными опухолями обычно не требуется ничего, кроме удаления опухоли в качестве лечения, однако в случаях со злокачественными опухолями опухоли следует ставить (оценивать на наличие метастазов). Собак с небольшими (менее 1 дюйма в диаметре) карциномами низкого гистологического уровня и аденокарциномами без признаков метастазирования можно эффективно лечить только хирургическим путем.Собаки с большими или инвазивными опухолями, высокой гистологической степенью, саркомами (опухолями мезенхимального происхождения), поражением лимфатических узлов и / или другими участками распространения подвержены риску как рецидива исходной опухоли, так и метастазов.
Ниже приведены общие классы опухолей молочной железы, которые могут быть обнаружены при биопсии.
Фиброаденома:
Доброкачественная железистая опухоль, лечение которой не требуется.
Смешанная опухоль молочных желез:
Смешанный тип клеток составляет опухоль: эпителиальные клетки, выстилающие железистую ткань, и мезенхимальные клетки, составляющие негландулярную часть.(Смешанная не относится к смеси доброкачественных и злокачественных клеток.) Смешанная опухоль может быть доброкачественной или злокачественной, и биопсия покажет это.
Аденокарцинома:
Аденокарциномы могут быть канальцевыми или папиллярными, в зависимости от клеток железы, из которых возникает опухоль. Аденокарциномы ведут себя злокачественно, но их агрессивность зависит не от того, являются ли они трубчатыми или папиллярными, а от других клеточных характеристик, описанных патологом (например, насколько быстро клетки делятся и насколько они похожи на нормальные клетки железы).Когда онколог прочитает описание, он или она сможет определить, насколько агрессивно бороться с опухолью
.
Воспалительная карцинома:
Очень злокачественная опухоль, которая вызывает сильнейшее локальное воспаление с изъязвлением, гноем и дискомфортом. Этот тип опухоли имеет тенденцию к раннему распространению и трудно поддается лечению. К счастью, на этот особенно трагический тип опухоли приходится менее 5% опухолей молочной железы.
Примерно 50% злокачественных опухолей молочной железы к моменту операции уже распространились.Остальные 50% находятся на месте, и хирургическое вмешательство носит лечебный характер.
Рекомендуется незамедлительное хирургическое удаление любой опухоли молочной железы, если только собака не очень старая или не имеет других заболеваний, которые исключают этот вариант. Если операция находится на ранних стадиях этого заболевания, рак может быть полностью устранен более чем в 50% случаев злокачественной формы рака. Размер иссеченной области зависит от решения ветеринара. Иногда удаляется только сама масса.Обычно это делается только тогда, когда опухоль очень локализована. Однако из-за того, как этот рак распространяется, обычно рекомендуется выполнить радикальное хирургическое вмешательство, которое влечет за собой удаление новообразования и всей ткани молочной железы и лимфатических узлов, которые стекают с железой. При некоторых типах опухолей, особенно саркомах, полное удаление может быть затруднено, и во многих из этих случаев опухоль снова вырастает на месте ранее удаленной опухоли. Только лучевая терапия, химиотерапия и антиэстрогеновая терапия использовались для лечения неоперабельного рака молочной железы, хотя и не очень успешно.
При распространенном раке молочной железы, где произошли метастазы или опухоль прикреплена к подлежащим тканям, операция не будет излечивающей, но может рассматриваться как вариант уменьшения локальной опухолевой нагрузки и улучшения качества жизни.
Хирургическое удаление молочной железы собаки владельцы могут спутать с радикальной мастэктомией у человека. У людей этот тип хирургии повлияет на подлежащую мышечную ткань, что затрудняет выздоровление. У собак вся ткань груди и связанные с ней лимфатические сосуды находятся за пределами мышечного слоя, поэтому необходимо только разрезать кожу и ткань молочной железы.Это значительно упрощает операцию и ускоряет выздоровление. Радикальная мастэктомия у собак означает одновременное удаление всей груди, кожи, покрывающей их, и четырех лимфатических узлов. Хотя это серьезная операция, нормальная деятельность, скорее всего, возобновится после снятия швов (через 10-14 дней после операции).
Многие ветеринары стерилизуют собаку после мастэктомии. Есть доказательства того, что удаление яичников и матки принесет ей пользу, поскольку это может снизить ее шансы замаскировать опухоли ложной беременностью и исключить риск опухолей яичников и матки.Кроме того, стерилизация позволит легко обнаружить любые новые опухоли, которые могут возникнуть, поскольку после операции ткань молочной железы сморщится (атрофируется).
В ветеринарных больницах с необходимым оборудованием иногда проводят хирургическое вмешательство с интраоперационным облучением, чтобы уменьшить вероятность местного рецидива. Последующая лучевая терапия первичного очага и дренирование лимфатического узла также может помочь уменьшить проблему местного рецидива и местных метастазов.
Наиболее часто используемым протоколом химиотерапии для профилактики метастазов злокачественного рака груди у собак был адриамицин каждые 21 день и пероральный цитоксан через день в течение 8 недель или на 3-6 день каждого 21-дневного цикла.Однако в последнее время многие онкологи перешли на использование митоксантрона (Novantrone ™) в качестве первого выбора, а затем адриамицина или карбоплатина для лечения резистентных заболеваний. Лечение химиотерапией может снизить способность циркулирующих раковых клеток метастазировать в легкие.
Некоторые ветеринары рекомендуют добавки, снижающие риск рака груди у женщин: гексафосфат инозита (IP6, полученный из риса) и 1-3-бета-глюкан (полученный из дрожжей). Имеет смысл рекомендовать эти продукты для всей жизни, поскольку у интактных сук наблюдается самый высокий уровень опухолей груди, чем у любого другого домашнего животного, и в три раза чаще, чем у женщин.Если эти «химиопрофилактические добавки» добавить в рацион, они могут сыграть роль в предотвращении рецидивов опухолей груди у предрасположенных собак.
Клинические исследования, изучающие эффективность системного химиотерапевтического агента Тамоксифен (препарат, который часто назначают женщинам с раком груди) при распространенном раке молочной железы у собак, не показали измеримого терапевтического эффекта ни у одной из собак, участвовавших в исследовании.
Тип опухоли важен для определения прогноза у собак.
Другие факторы включают:
Размер опухоли: опухоли диаметром более 1,5 дюйма имеют худший прогноз, чем опухоли меньшего размера. Чем больше опухоль груди, тем выше риск ее распространения на лимфатические узлы, легкие или другие части тела. Опухоли размером менее 3 см имеют относительно низкую частоту рецидивов, по сравнению с опухолями размером более 3 см, которые имеют довольно высокую частоту рецидивов.
Признаки распространения в лимфатическую систему (например, наличие опухолевых клеток в локальном лимфатическом узле или видимых опухолевых клеток с лимфатическими сосудами при биопсии) имеют худший прогноз.
Более глубокие опухоли или прилипание опухоли к более глубоким тканевым структурам имеют худший прогноз.
Язвенная поверхность опухоли имеет худший прогноз.
История особенно быстрого роста имеет худший прогноз.
Образец биопсии не только идентифицирует тип опухоли, но также покажет, была ли опухоль полностью удалена (так называемые «чистые» или «грязные» края).Опухоли
, удаленные с чистыми краями, имеют лучший прогноз. Если опухоль не была удалена полностью, следует рассмотреть возможность повторной операции по удалению большего количества ткани.
Если в отчете о биопсии указано, что опухоль груди распространилась на лимфатические узлы, лимфатические каналы или кровеносные сосуды, прогноз плохой.
Если в отчете о биопсии указано, что опухоль окружена клетками, называемыми лимфоцитами,
ожидается лучший прогноз.
Опухоли молочной железы — одни из самых распространенных опухолей у кошек; Домашние короткошерстные и сиамские кошки могут иметь более высокий уровень заболеваемости, чем другие породы.Средний возраст обращения составляет от 10 до 12 лет. Большинство пораженных кошек — интактные самки; однако болезнь иногда встречается у стерилизованных самок и, реже, у котов. В нескольких отчетах задокументирована тесная связь между использованием противозачаточных средств и развитием доброкачественных или злокачественных новообразований молочной железы у кошек.
Приблизительно 85% опухолей молочной железы у кошек являются злокачественными и гистологически классифицируются как аденокарциномы. Саркомы, муцинозные карциномы, папилломы протоков, аденосквамозные карциномы и аденомы встречаются редко.Доброкачественные дисплазии молочных желез (лобулярная гиперплазия и фиброэпителиальная гиперплазия) встречаются реже.
Прежде чем предпринимать какие-либо диагностические или терапевтические меры, необходимо полностью оценить состояние здоровья кошки. Для выявления любых предоперационных отклонений необходимо провести анализ крови и мочи. Рентгенограммы грудной клетки (как в правой, так и в левой боковой и вентродорсальной плоскостях) должны быть получены для поиска метастазов в легких, лимфатических узлах и плевре. Предварительная биопсия обычно не рекомендуется, поскольку от 80 до 85% новообразований в молочной железе кошек являются злокачественными.Регионарные лимфатические узлы (лимфатические узлы) следует тщательно пальпировать; Для определения наличия метастазов необходима тонкоигольная аспирация или хирургическое удаление.
Хирургия — это наиболее широко используемый метод лечения новообразований молочной железы у кошек; он используется отдельно или в сочетании с химиотерапией. Радикальная мастэктомия (то есть удаление всех желез на пораженной стороне) является хирургическим методом выбора, поскольку она значительно снижает вероятность местного рецидива опухоли. В отличие от собак, у которых в тщательно отобранных случаях могут быть уместны более консервативные резекции, большинству кошек выгодна полная односторонняя или двусторонняя мастэктомия.Паховый лимфатический узел практически всегда удаляется вместе с молочной железой, в то время как подмышечные лимфатические узлы удаляются только в том случае, если они увеличены и цитологически положительны на опухоль.
Было показано, что комбинированная химиотерапия с использованием доксорубицина и циклофосфамида или карбоплатина вызывает кратковременный ответ примерно у половины кошек с метастатическим или неоперабельным местным заболеванием и рекомендуется после полного удаления опухоли для продления периода без заболевания и отсрочки. развитие метастазов.Эти химиотерапевтические препараты вводятся каждые 3–4 недели в течение 4–6 циклов после полного удаления первичной опухоли. Побочные эффекты, связанные с этими протоколами, включают анорексию (отсутствие аппетита) и миелосупрессию (низкие показатели крови).
При консервативном хирургическом вмешательстве у 66% кошек рецидив в месте операции. Наиболее значимыми прогностическими факторами, влияющими на время рецидива и продолжительность жизни кошек со злокачественными опухолями молочной железы, являются размер опухоли, объем хирургического вмешательства и гистологическая оценка.Размер опухоли — единственный наиболее важный прогностический фактор. Кошки с опухолями более 3 см в диаметре имеют среднее время выживания от 4 до 6 месяцев; кошки с опухолями диаметром от 2 до 3 см имеют среднее время выживания около 2 лет, а кошки с опухолями диаметром менее 2 см имеют среднее время выживания более 3 лет.
Таким образом, ранняя диагностика и лечение жизненно важны для кошек с опухолями молочной железы.
У собак, стерилизованных в молодом возрасте, снижен риск развития опухолей молочной железы, эквивалента рака груди у собак.Ранняя стерилизация снижает уровень выработки эстрогена, что заставляет многих ветеринаров и ученых рассматривать эстроген в негативном свете, когда речь идет о раке молочной железы.
Но влияние эстрогена на риск рака у собак не однозначно, согласно новому исследованию, проведенному учеными из Школы ветеринарной медицины Пенна. Хотя ясно, что стерилизация собак значительно снижает риск развития рака молочной железы, результаты показывают, что такая практика может увеличить риск более агрессивных форм рака.А у стерилизованных животных с опухолями молочной железы команда обнаружила, что более высокие уровни эстрогена в сыворотке на самом деле являются защитными, связаны с более длительным временем до метастазирования и увеличением времени выживания.
«У собак, которые остаются неповрежденными и у которых есть яичники, развивается намного больше опухолей молочной железы, чем у собак, которым стерилизовали, поэтому удаление этого источника эстрогена действительно имеет защитный эффект», — говорит Карин У. Соренмо, ветеринарный онколог Penn Vet и старший автор книги исследование, опубликованное в PLOS ONE .«Кажется, что эстроген действительно способствует развитию рака молочной железы. Но то, что он делает для прогрессирования метастазов, — это, на мой взгляд, более сложно».
Соренмо и его коллеги изучают опухоли молочной железы у собак как способ улучшения ухода и лечения домашних животных, а также для понимания биологии рака груди человека.
«Большая часть исследований, которые мы проводим в ветеринарии, изучает то, что происходит с людьми, а затем адаптирует их», — говорит она. «Но собаки — такая прекрасная всеобъемлющая модель рака.Да, есть различия в биологии между собаками и людьми, но здесь эти различия могут позволить нам задать очень важные вопросы о том, что эстроген делает как у собак с раком молочной железы, так и у женщин с раком груди ».
В исследовании использовались данные двух проспективных исследований, в том числе одного с участием собак в программе лечения опухолей молочной железы при ветеринарном приюте Пенсильвании, в рамках которой проходят лечение собаки из приютов с опухолями молочной железы, изучаются такими исследователями, как Соренмо, а затем находят приемные или постоянные дома.
Команда обследовала 159 собак с раком молочной железы, 130 из которых были стерилизованы в рамках исследования, а 29 остались нетронутыми. В дополнение к хирургическому удалению измеримых опухолей у собак, команда собрала информацию об уровнях эстрогена в сыворотке, типе опухоли, степени и стадии заболевания, времени до метастазирования и времени выживания.
Несмотря на связь эстрогена с повышенным риском развития опухолей молочной железы, исследователи обнаружили, что более высокие уровни эстрогена в сыворотке также помогают собакам избежать некоторых из наиболее рискованных аспектов их болезни.Неожиданно, когда собакам стерилизовали одновременно с удалением опухолей, у собак с эстроген-положительными опухолями, у которых был более высокий уровень эстрогена в сыворотке, потребовалось больше времени для развития метастатического заболевания и они выжили дольше, чем собаки с более низким уровнем эстрогена, что подтверждает, что эти опухоли зависят от эстрогена. для прогресса.
Соренмо предполагает, что в этих случаях действие эстрогена может быть нюансированным. «Это приводит к развитию рака, но также, кажется, контролирует или модулирует его, сдерживая его», — говорит она, потому что у большинства собак с высоким уровнем эстрогена в сыворотке были опухоли низкого уровня и положительные по рецепторам эстрогена, что делало их восприимчивыми к гормональной депривации. стерилизация.
Защитная роль эстрогена также неожиданно была выражена у собак с опухолями молочной железы, отрицательными по эстроген-рецепторам. При этих формах рака высокого риска высокий уровень эстрогена в сыворотке был связан с отсроченным или отсутствием метастазов. Дополняя эти данные и подтверждая потенциально более широкий, независимый от опухолевых рецепторов противораковый эффект, обусловленный эстрогеном, собаки с низким уровнем эстрогена в сыворотке крови имели значительно повышенный риск развития других агрессивных фатальных опухолей, не связанных с молочной железой, таких как гемангиосаркома, во время их последующего наблюдения. после операции на опухоли молочной железы.
Некоторые результаты противоречат результатам, полученным у женщин с раком груди. Например, более высокий уровень эстрогена в сыворотке крови у женщин после лечения рака груди был связан с более высокой частотой рецидивов. Но Соренмо также отмечает, что многие случаи рака груди у женщин возникают сразу после менопаузы, когда уровень эстрогена падает. Таким образом, эстроген может играть более сложную роль в риске рака у людей.
Работа указывает на новые возможности для изучения роли эстрогена в возникновении и прогрессировании рака.Соренмо и его коллеги, в том числе Сьюзан Фолк из Penn Vet и Эллен Пюре, проводят исследования того, как гормон влияет на микросреду опухоли, клетки, которые сами по себе не являются злокачественными, но могут сдерживать или стимулировать рост и распространение опухоли.
«Я думаю, что это исследование открывает несколько действительно сложных вопросов», — говорит Соренмо. «Если мы начнем точно анализировать, что делает эстроген, с какими генами или иммунными клетками он взаимодействует, возможно, мы сможем использовать силу эстрогена, чтобы быть более умными в наших стратегиях лечения.«
Козы — один из старейших домашних животных. Их разводят для получения молока и мяса, и они играют важную роль в питании людей, особенно в развивающихся странах. Их число постоянно увеличивается с годами, и, по оценкам, численность населения превышает миллиард (FAOSTAT, 2013). Однако козы полезны не только для производства продуктов питания.Благодаря своим анатомическим и физиологическим характеристикам, относительно короткому периоду беременности, раннему половому созреванию, а также недорогому и простому обслуживанию они ценны для фундаментальных исследований, для биотехнологических приложений и в качестве животных моделей в медицинских исследованиях. Например, козы используются для изучения болезней сердца и суставов [1] и являются прекрасными модельными видами для изучения развития молочных желез и лактации [2].
Молочная железа грызунов является наиболее широко изученной и предоставила много биологических сведений, но ее анатомия и физиология не полностью репрезентативны для молочных желез человека или жвачных животных.Морфологическое развитие молочной железы у человека и жвачных гораздо больше похоже [3]. Учитывая размер, расположение молочной железы (две основные железы) и механизм секреции, который является апокринным у коз и людей, тогда как мерокрин у крупного рогатого скота, козы кажутся лучшим выбором для моделирования молочной железы человека по сравнению с коровами или грызуны. Культуры тканей / клеток молочных желез коз могут служить ценными моделями для изучения лактации, развития молочных желез и патологий, включая неоплазию, которая по неизвестным причинам крайне редко встречается у жвачных животных, несмотря на анатомическое и физиологическое сходство с людьми [4].Кроме того, генетически модифицированные жвачные животные (особенно козы) использовались в качестве «биореакторов» для производства рекомбинантных белков. Рекомбинантные белки можно контролировать с помощью индуцибельных, специфичных для молочной железы промоторов и экспрессировать в молочной железе, откуда их можно относительно легко выделить из молока. Например, первый коммерческий рекомбинантный белок человека, продуцируемый трансгенными животными, был получен и экстрагирован из молока трансгенных коз [5]. Кроме того, трансгенных молочных коз можно использовать для производства молока с особыми питательными характеристиками [6], что может быть полезно, особенно в развивающихся странах.
Знания о клетках молочной железы коз и биологии молочной железы коз полезны для различных областей науки, например, сельского хозяйства (повышение надоя и стойкости лактации и производство молока с особыми характеристиками), фундаментальных исследований (понимание биологии молочных желез), медицины (модельные организмы) ) и биофарма (экспрессия рекомбинантных белков в козьем молоке). В этой главе мы описываем методы создания и характеристики первичных культур клеток молочной железы коз (pgMECs) и возможные приложения, для которых модель клеток может использоваться вместо ткани молочной железы.Установленные клетки можно выращивать in vitro, в течение нескольких пассажей, и они остаются гормонально-чувствительными и способными к синтезу молочного белка. Клетки могут быть использованы для фундаментальных исследований биологии лактации, исследований иммунитета молочных желез, идентификации / выделения стволовых клеток / клеток-предшественников и других применений.
В этом разделе мы кратко описываем материалы и методы, используемые для создания, роста, характеристики и процедуры с первичными культурами, которые применимы к результатам, описанным в следующих разделах.
Первичные культуры были получены из ткани молочной железы убойных животных. Для сбора тканей использовали лактирующих коз разного возраста и нелактирующих молодых коз в возрасте приблизительно от четырех до семи месяцев. Всю молочную железу удаляли сразу после убоя, протирали 70% этанолом и обрабатывали в асептических условиях.Сначала из железы были удалены более крупные кусочки железистой ткани. В качестве альтернативы можно использовать тканевые биопсаты вместо цельной молочной железы. В зависимости от желаемого количества клеток в культуре можно обрабатывать различные количества ткани. В нашем случае примерно 100 г иссеченных кусочков ткани промывали сбалансированным солевым раствором Хэнка (HBSS), содержащим пенициллин (200 мкг / мл), стрептомицин (200 мкг / мл), гентамицин (200 мкг / мл), ампициллин ( 200 мкг / мл) и амфотерицин B (10 мкг / мл) и механически измельчали ножницами и скальпелями.Измельченную ткань переваривали в 100-миллилитровом растворе коллагеназы и гиалуронидазы (400 Ед / мл каждой), приготовленном в HBSS с HEPES (4- (2-гидроксиэтил) -1-пиперазинэтансульфоновая кислота), также содержащем все вышеперечисленное. антибиотики в тех же концентрациях. Переваривание проводили при 37 ° C при осторожном встряхивании. Фракции диссоциированных клеток собирали через 60, 120 и 180 мин инкубации, фильтруя содержимое через стальную сетку и добавляя свежий раствор ферментов к остаткам измельченной ткани.Фильтраты помещали в пробирки объемом 50 мл, промывали (разбавляли) HBSS и центрифугировали при 1200 об / мин в течение 5 мин. Осадки можно ресуспендировать в HBSS и несколько раз центрифугировать для удаления остатков клеток. Наконец, ресуспендированные клетки фильтровали через сетчатый фильтр для клеток с размером пор 40 мкм, центрифугировали при 1200 об / мин в течение 5 минут, ресуспендировали в среде для выращивания и высевали на сосуды для культур тканей или ресуспендировали в среде для замораживания (90% FBS и 10% DMSO) для замораживания. в жидком азоте. Основные этапы обработки ткани показаны на рисунке 1.
Механическая и ферментативная обработка ткани молочной железы (фото: Я. Огоревц). (A) Удаление кожи, покрывающей ткань молочной железы. (B) Кусочки ткани иссечены из железы. (C) Тонкая механическая обработка ткани. (D) Диссоциация ткани в коктейле ферментов. Наконец, диссоциированные клетки собирали центрифугированием и высевали в колбы для культур клеток.
Возможен метод культивирования эксплантатов, альтернативный ферментативному расщеплению. В этом случае важно механически измельчить извлеченную ткань до очень мелких кусочков и инкубировать мелко измельченную ткань в ростовых сосудах (снабженных питательной средой) в течение нескольких дней, используя условия, описанные ниже.Через несколько дней клетки начнут эксплантировать и прикрепиться к чашкам для культивирования. После этого кусочки ткани можно удалить из сосудов, а прикрепленные клетки перенести в новую чашку. По нашему опыту, культура эксплантата будет давать более низкий выход клеток; однако полученная культура может быть более обогащена желаемым (эпителиальным) типом (ами) клеток, как в случае ферментативного переваривания, когда другие типы клеток (например, фибробласты) могут присутствовать в значительном количестве.
Клетки выращивали в среде роста RPMI 1640 с добавлением 0.1 ммл-метионин, 0,4 ммл-лизин, 2 г / л NaHCO 3 , 1 мМ Na-пируват, 2 ммл-глутамин, 10% фетальная бычья сыворотка, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина. Для моделирования лактогенных условий в основную питательную среду добавляли лактогенные гормоны, такие как инсулин (1 мкг / мл), гидрокортизон (1 мкг / мл) и пролактин (1 мкг / мл), и клетки выращивали на коммерчески приготовленных поверхность, покрытая матрицей базальной мембраны (например, Matrigel, Geltrex). Клеткам позволяли разрастаться на поверхности, дифференцироваться и устанавливать межклеточные и межклеточные взаимодействия.
Клетки выращивали в атмосфере 5% CO 2 при 37 ° C, 5% CO 2 и насыщенной влажности. Среду для выращивания меняли каждые два-три дня. При выполнении пассирования клетки обрабатывали 0,25% трипсином-ЭДТА и инкубировали при 37 ° C до тех пор, пока клетки не отделились от поверхности. Клетки центрифугировали и ресуспендировали в питательной среде в соотношении 1: 5. В случае контаминации фибробластов для уточнения культуры можно использовать разное время отделения фибробластов и эпителиальных клеток.Фибробласты образуют более слабые взаимодействия между клетками и клеточной поверхностью и обычно быстрее отделяются. Эта характеристика может быть использована для обогащения эпителиальных клеток в культуре, используя принцип дифференциальной трипсинизации. Трипсин-ЭДТА можно разбавить до более низкой концентрации (например, 0,05%), чтобы увеличить время отслоения и лучше контролировать процедуру.
Установленные клетки следует регулярно проверять на возможные инфекции, вызываемые микоплазмами разных видов. Мы предлагаем детекцию на основе ПЦР последовательностей ДНК, специфичных для микоплазм, с использованием универсальных праймеров 16S рибосомной РНК, как описано ранее [7].
Для профилирования транскрипции общую РНК выделяли из водной фазы лизированных pgMEC и обратно транскрибировали в комплементарную ДНК (кДНК), которую подвергали секвенированию нового поколения (NGS), как описано в Ref. [8]. Кроме того, были выполнены полимеразные цепные реакции с обратной транскрипцией (RT-PCR) для мониторинга экспрессии выбранных маркеров, специфичных для определенного типа клеток в культуре.Метод количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (RT-qPCR) использовался для определения относительных количеств маркеров и соотношений между ними (например, экспрессия казеинов в базальной и лактогенной среде). Из-за плохой аннотации генома козы праймеры для ПЦР были сконструированы против последовательностей мРНК Bos taurus RefSeq (NCBI) и сопоставлены с эталонными последовательностями козы, если таковые имеются. Сначала мы определили экспрессию маркеров на уровне мРНК, а затем перешли к уровню белка (например, иммуноокрашивание и вестерн-блоттинг).
Чтобы выявить виновников мРНК бета-казеина (CSN2), мы провели полимеразную цепную реакцию с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР) на библиотеке транскриптомов (кДНК), полученной из pgMEC, с использованием следующей пары праймеров CSN2-F: 5′-ACAGCCTCCCACAAAACATC -3 ‘, CSN2-R: 5′-AGGAAGGTGCAGCTTTTCAA-3’. Полученный в результате продукт длиной 206 п.н. выделяли из агарозного геля с использованием набора для экстракции геля и секвенировали секвенированием по Сэнгеру для подтверждения того, что последовательности соответствуют части седьмого экзона гена CSN2 (GenBank: AJ011019).
Количественные полимеразные цепные реакции в реальном времени (RT-qPCR) состояли из 2 × SYBR Green PCR master mix (Life Technologies), воды и 0,5 мкМ каждого праймера в общем объеме 20 мкл. Циклы были следующими: 10 мин при 95 ° C, затем 40 циклов при 95 ° C в течение 15 с и 60 ° C в течение 1 мин. Кривую плавления определяли через 15 с для 95 ° C, 1 мин при 58 ° C и 15 с при 95 ° C. Использовали следующие праймеры: рецептор эстрогена 1 (ESR1), прямой: 5′-ACAGCATGAAGTGCAAGAACGTGG-3 ‘и обратный: 5′-TGCAAGGAATGCGATGAAGTGCAG-3′; рецептор прогестерона (PGR) вперед: 5’-AAGCCAAGCCCTAAGCCAGAGAAT-3 ‘и обратно: 5′-AGCTGGAGGTAT-CAGGTTTGCTGT-3′; и CSN2 вперед: 5’-ACAGCCTCCCACAAAACATC-3 ‘и назад: 5′-AGGAAGGTGCAGCTTTTCAA-3’.Экспрессию глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (GAPDH) использовали в качестве эндогенного контроля, используя пару праймеров: прямой: 5′-CATGTTTGTGATGGGCGTGAACCA-3 ‘и обратный: 5′-TAAGTCCCTCCA-CGATGCCAAAGT-3’.
Протоколы иммуноокрашивания часто различаются для разных маркеров, и для каждого маркера может потребоваться оптимизация протокола. Как правило, протокол состоял из фиксации клеток в течение от 30 с до 1 мин в ледяной смеси ацетон / метанол (1: 1) или в течение нескольких минут в 4% параформальдегиде.За фиксацией следовала пермеабилизация (не требуется при использовании фиксации ацетон-метанол или в случае мембраносвязанных маркеров) 0,3% Triton X-100 в течение 10 мин. После промывания физиологическим раствором с фосфатным буфером (PBS) клетки блокировали 5-10% фетальной сывороткой (рекомендуется использовать фетальную сыворотку тех видов, у которых были продуцированы вторичные антитела) и 1-3% бычьим сывороточным альбумином (BSA) в течение 60 дней. мин. Инкубацию с первичными антителами проводили в течение ночи при 4 ° C. На следующий день клетки несколько раз промывали PBS и инкубировали с флуоресцентно меченными вторичными антителами при комнатной температуре в течение 1 часа.После промывки PBS ядра клеток можно контрастировать с 4 ‘, 6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI), промыть и визуализировать под микроскопом. В случае парафинированной ткани срезы депарафинизировали с использованием ксилола и регидратировали при уменьшающихся концентрациях этанола. Регидратированные срезы ткани промывали PBS с последующим извлечением антигена, индуцированным нагреванием, в микроволновой печи с использованием 10 мМ натрий-цитратного буфера (pH 6). После этого для иммунофлуоресцентного окрашивания использовали тот же протокол, что и для pgMECs.Более подробные протоколы и используемые антитела описаны в наших предыдущих публикациях [8, 9, 10].
При проведении анализа образования атмосферы одноклеточная суспензия клеток молочной железы была выращена в среде DMEM / F12 с добавлением EGF (20 нг / мл), bFGF (человека, 20 нг / мл), гепарина ( 4 мкг / мл), холерный токсин (10 нг / мл), гидрокортизон (0,5 мкг / мл), инсулин (0,5 мкг / мл) и добавка B27 (2%), и выращенные в 6-луночных планшетах с ультранизким креплением или без внеклеточного мембранного матрикса, или в виде висящих капель, согласно описанному протоколу [11].
Среду для выращивания аспирировали и pgMEC фиксировали в 4% параформальдегиде в течение 15 мин. Oil Red O (0,5 г) растворяли в 50 мл изопропанола и разбавляли водой (3: 2), затем оставляли на 10 мин, после чего раствор фильтровали через фильтр 20 мкм. Клетки кратковременно промывали изопропанолом (60%) и инкубировали с раствором Oil Red O в течение 15 мин при комнатной температуре. Затем клетки промывали изопропанолом и промывали водопроводной водой. Образование липидных капель (красное пятно) наблюдали под светлопольным микроскопом.
Развитие молочной железы происходит поэтапно; пролиферация и дифференцировка клеток молочной железы зависят от полового развития и размножения, которые находятся под контролем эндокринной системы [12]. Железа в основном состоит из мезенхимальной и эпителиальной ткани, которая подвергается значительному ремоделированию во время цикла лактации. Ремоделирование ткани включает в себя пролиферацию и дифференцировку эпителиальных клеток, образующих функциональную железистую ткань, с последующим регрессом ткани из-за апоптоза и утраты железистой структуры и функции (инволюция).Функциональная часть молочной железы — это железистая ткань, соединенная разветвленной системой вторичных протоков, объединяющихся в более крупные первичные протоки, которые заканчиваются цистерной железы. Молоко синтезируется секреторными клетками просвета, расположенными в сферических структурах, называемых альвеолами, которые образуют более крупные структуры, называемые дольками. Альвеолы и протоки лактирующей молочной железы состоят из различных типов эпителиальных клеток, важных для синтеза и секреции молока, в то время как соединительная и жировая ткань окружают и поддерживают эпителиальные структуры.Альвеола состоит из одного слоя секретирующего молоко просветного эпителия, окруженного одним слоем сократительных миоэпителиальных клеток, которые лежат рядом с базальной мембраной, где также находятся стволовые клетки / клетки-предшественники молочных желез [10].
В соответствии с «заменой» трех принципов (3R: замена, сокращение и уточнение) адекватная модель in vitro , имитация функции молочной железы позволяет изучать физиологические, биохимические и иммунные функции молочная железа, заменив in vivo на экспериментов.В дополнение к этическим вопросам, клеточные линии позволяют использовать множество технических копий, лучше контролировать окружающую среду и преодолевать проблему вариативности, вызванную индивидуальностью животного [13], и проблему системных эффектов, что позволяет прояснить вклад конкретный тип клеток представляет интерес затруднительно [14]. Основным ограничением первичных клеточных моделей является конечный срок жизни, а ограниченное количество доступных биологических реплик, поскольку производная культура клеток, представляет один генотип, в то время как создание и характеристика большого количества клеточных культур / линий является довольно сложной задачей. и трудоемкий процесс.Кроме того, культуры клеток не всегда правильно моделируют условия in vivo ; поэтому ограничения следует учитывать для каждой отдельной цели.
Несколько иммортализованных линий эпителиальных клеток молочных желез, таких как MAC-T [15] и BME-UV [16], были созданы путем геномной интеграции большого Т-антигена обезьяньего вируса (SV40LTA). Однако трансформированные клетки молочной железы изменяются генетически и (обычно) фенотипически. Преходящие линии молочных желез демонстрируют низкую чувствительность к лактогенным гормонам [17] и не соответствуют in vivo при лактации .Генетические модификации и приспособления к росту в клеточных культурах изменяют метаболические пути в непрерывных клеточных линиях; поэтому использование первичных клеток является гораздо лучшим приближением к системе in vivo [18].
Полученная первичная клеточная культура состояла из гетерогенной популяции в основном эпителиальных и мезенхимальных (фибробластоподобных) клеток. Эпителиальные клетки росли в виде округлых плотно упакованных островков клеток с множественными ядрышками и имели типичную морфологию булыжника.Клетки, беспорядочно распространяющиеся вокруг этих островков, были более крупными, веретенообразными клетками, морфологически напоминающими фибробласты (рис. 2).
Первичная культура через 5 дней после посева под светлопольным микроскопом (фото: Я. Огоревц). (A) Гетерогенные типы клеток, видимые в первичной культуре (40-кратное увеличение; масштабная линейка = 200 мкм). (B) Острова эпителиальных клеток, окруженные мезенхимальными клетками (фибробластами). Клеточный дебрис можно наблюдать в первичной культуре до первого пассирования (100-кратное увеличение; масштабная линейка = 100 мкм).(C) Плотно упакованный остров эпителиальных клеток (200-кратное увеличение; масштабная линейка = 50 мкм).
Пролиферация клеток была медленной в течение первой недели после посева диссоциированных клеток в пластиковые чашки. После первого пассажа клетки начали размножаться намного быстрее и каждые несколько дней зарастали поверхность. Никаких изменений в пролиферации, морфологии или росте не было замечено более чем за пять пассажей (рис. 3). Когда клетки находились в состоянии полного слияния (без пассирования) в течение длительного периода времени, они начинали проявлять признаки старения.
Линии клеток молочной железы после пассирования (фото: J. Ogorevc). (А) Эпителиальные и мезенхимальные клетки при 40-кратном увеличении (шкала = 200 мкм). (B) Остров эпителиальных клеток (справа) и мезенхимальных клеток (слева) (увеличение 200 ×; шкала = 50 мкм). (C) Обогащенная культура эпителиальных клеток после дифференциальной трипсинизации и удаления фибробластов (200-кратное увеличение; масштабная линейка = 100 мкм).
Различные типы клеток экспрессируют гены, специфичные для определенного типа клеток, которые можно рассматривать как маркеры характеристики.Черновик таких маркеров использовали для характеристики производных pgMEC и для различения различных типов клеток в гетерогенной первичной культуре клеток.
Профиль транскрипции, созданный NGS, показал, что маркеры, типичные для базальных / миоэпителиальных и просветных эпителиальных клеток, были высоко экспрессированы. Наиболее выраженными были разные кератины, десмоплакин и актины. Экспрессия маркеров варьируется в зависимости от количества различных типов / линий клеток, присутствующих в культуре и в условиях культивирования, которые могут способствовать пролиферации определенного типа клеток и могут способствовать дифференцировке (например,г. эпителиально-мезенхимальные переходы).
Методом выбора для характеристики различных типов клеток в культуре клеток является окрашивание клеток антителами, специфичными для ткани / типа клеток, которые выявляют присутствие и локализацию маркеров в клетках. Анализ экспрессии полнотранскриптомной мРНК и обзор предыдущих исследований, касающихся отличительных маркеров, специфичных для молочной железы, у разных видов, представляют собой обоснование для выбора антител, потенциально полезных для характеристики основных типов клеток в ткани молочной железы козы и полученных культур клеток.Определение характеристик на основе антител является сложной задачей для жвачных животных (особенно коз), поскольку большинство коммерчески доступных антител нацелены на антигены человека или грызунов, в то время как их реакционная способность у жвачных животных обычно неизвестна и должна определяться эмпирически. Для определения наличия маркеров белка, специфичного для молочной железы, проводили иммунофлуоресцентное окрашивание различными антителами.
Основываясь на наших результатах, мы предлагаем цитокератины (KRT) 14 и 18, а также виментин (VIM) в качестве подходящих маркеров для базовой характеристики первичных культур клеток молочной железы (рис. 4).А именно, клетки мезенхимального происхождения (например, фибробласты) экспрессируют VIM (рис. 4A и B), KRT 14 отличается от миоэпителиальных (рис. 4E и F), тогда как KRT18 — от клеток просветного эпителия (рис. 4C и D). На основе этих трех маркеров можно отличить эпителиальные клетки от мезенхимальных клеток и различить базальные / миоэпителиальные и просветные клетки.
Основные характеристики pgMEC. Фиксированные pgMEC в ярком поле (A, C и E) и флуоресцентном освещении (B, D и F) при 40-кратном увеличении (A – D; масштабные полосы = 20 мкм) и 20-кратном увеличении (E и F; масштабные линейки) = 50 мкм) (фото: J.Огоревц). Флуоресцентно меченые вторичные антитела использовали для визуализации экспрессии и локализации маркеров, а контрастное окрашивание DAPI использовали для визуализации ядер. (A и B) Клетки, иммуноокрашенные первичными антителами против VIM. Окрашивание веретеновидных фибробластов на VIM. (C и D) Двойное окрашивание на KRT14 и KRT18. Эпителиальные клетки просвета окрашены на KRT18 (D), а миоэпителиальные — на KRT14 (D). Интересно, что при выращивании при низкой конфлюэнтности клетки имели тенденцию организовываться, как в альвеолах, миоэпителиальные клетки, окружающие клетки просвета.(E и F) Окрашивание для KRT14. Видны два островка эпителиальных клеток; миоэпителиальные клетки, окрашенные на KRT14 (верхний правый угол), тогда как в просветных эпителиальных клетках не видно окрашивания KRT14 (слева).
Дополнительные маркеры, полезные для отличия эпителиальных клеток от других типов клеток и для определения подтипов эпителия, включают различные кератины (например, 5, 19), молекулу адгезии эпителиальных клеток (EPCAM), рецептор эстрогена 1 (ESR1), опухолевый белок p63 (TP63), субъединица интегрина бета 1 (ITGB1 / CD29), субъединица интегрина альфа 6 (ITGA6 / CD49f), рецептор прогестерона (PGR), альфа-актин гладких мышц (ACTA2), казеины (например,г. CSN2) и муцин 1 (MUC1).
Кроме того, залитые парафином срезы ткани молочной железы козы окрашивали для сравнения экспрессии маркеров между pgMEC и тканью молочной железы (рис. 5). Большинство маркеров показали реактивность как в культурах клеток, так и в ткани, тогда как некоторые из маркеров показали реактивность только в pgMEC (ESR1, CD49F и KRT5) или только в ткани (TP63). Срезы тканей подвергаются химической и физической обработке, что может привести к изменению конформации и маскировке антигена.С другой стороны, pgMECs адаптируются к среде in vitro , что может изменять клеточный метаболизм и экспрессию маркеров. Следовательно, возможны расхождения в результатах иммуноокрашивания между тканью и pgMEC. Например, маркер EpCAM был локализован в цитоплазматическом компартменте pgMEC (фиг. 5A и B), а также был обнаружен в эпителиальных компартментах ткани молочной железы козы (фиг. 5C и D). В случае MUC1 слабый сигнал наблюдался в pgMEC (рис. 5E и F), а сильный сигнал, показывающий отличительную локализацию MUC1 только на апикальных плазматических мембранах секреторных (просветных) эпителиальных клеток, был обнаружен в ткани молочной железы (рис. 5G и H). ).
Иммунофлуоресценция pgMEC и ткани молочной железы козы в ярком поле и флуоресцентном освещении, окрашенных против EpCAM (A – D) и MUC1 (E – H) (увеличение 20 ×; масштабные полосы = 50 мкм) (фото: Я. Огоревц). Были использованы вторичные антитела, меченные флуоресцентной меткой (зеленые), и контрастный краситель DAPI был использован для визуализации ядер (синий). Культура клеток молочной железы (A и B) и эпителиальные клетки ткани (C и D) окрашиваются против специфичного для эпителиальных клеток маркера EpCAM. pgMECs показали слабое окрашивание против MUC1 (E и F), тогда как сильный сигнал, локализованный на апикальных мембранах альвеолярных структур, наблюдался в ткани (G и H).
В условиях, которые не позволяют прилипать к поверхности, дифференцированные эпителиальные клетки подвергаются аноикису. Рост в условиях отсутствия адгезии и отсутствия сыворотки является характеристикой стволовых клеток / клеток-предшественников молочной железы, которые в таких условиях образуют сферические структуры, называемые маммосферами. Сферические структуры, образованные эпителиальными клетками молочной железы человека, содержат обогащенную популяцию клеток, способных дифференцироваться в просветные или миоэпителиальные клетки (бипотентные предшественники) [19].Молекулярные и клеточные процессы в молочных железах аналогичны процессам в развивающихся альвеолах молочной железы [20]. Иерархически клетки молочных желез варьируются от терминально дифференцированных клеток до недифференцированных клеток-предшественников и стволовых клеток, причем последние два являются вероятными мишенями для злокачественных трансформаций при раке [21]. Было показано, что целая молочная железа может быть восстановлена из одной стволовой клетки молочной железы [22]. Существование стволовых клеток / клеток-предшественников молочной железы у коз было впервые продемонстрировано [10].
В неприлипающих условиях через несколько дней образовывались плавающие массы неправильной формы (органоиды). Агрегаты, которые возникли в пластинах со сверхнизким прикреплением (рис. 6А) в среде, дополненной матрицей базальной мембраны, были более округлыми и крупными по форме, чем те, которые выращивались в среде без матрицы базальной мембраны. Иммуноокрашивание фиксированных маммосфер показало, что люминальные (KRT18-положительные) и базальные / миоэпителиальные (KRT14-положительные) клетки были основными составляющими маммосфер [8].Кроме того, маммосферы выращивали методом висячей капли. Метод «висящей капли» используется в качестве одного из тестов in vitro для определения плюрипотентного характера предполагаемых стволовых клеток. Сферические структуры появлялись после нескольких дней роста висящих капель. Их было меньше, но они были больше и округлой формы (рис. 6В), по сравнению с маммосферами, выращенными на пластинах со сверхнизким креплением. Маммосферы фиксировали на предметных стеклах и окрашивали DAPI и антителами против KRT14 и 18.Они состояли из нескольких сотен клеток (рис. 6D), которые были KRT14- или KRT18-положительными. Висячая капля — это эффективный метод выращивания молочных желез из первичных культур молочных желез. Клетки, избегающие аноикиса и образующие органоиды, вероятно, представляют собой предшественников молочных желез.
Формирование сферических структур в pgMEC через 7 дней роста в условиях отсутствия адгезии (фото: J. Ogorevc). (A) Сферические структуры в пластинах с низким креплением (20-кратное увеличение; масштабная линейка = 50 мкм).(B) Органоиды (маммосферы), выращенные в свисающих каплях (4-кратное увеличение; масштабная линейка = 200 мкм). (C и D) DAPI-окрашенные фиксированные маммосферы, выращенные в свисающих каплях при ярком поле (C) и флуоресцентном освещении (D) (100-кратное увеличение; масштабная линейка = 100 мкм). Количество клеток в органоидных структурах можно оценить по количеству окрашенных ядер (синий).
Развитие молочных желез, гормональная реакция клеток молочных желез, регулирование сцеживания, моделирование состава молока и его коагуляционных свойств, повышение надоев и врожденный иммунитет — вот некоторые из интересов современного молочного производства.Охарактеризованные линии клеток молочной железы являются полезными моделями для изучения биологии молочной железы. Например, мы использовали клетки для исследования инфекции с помощью распространенного возбудителя мастита у коз — Mycoplasma agalactiae (штамм PG2) — и для изучения различий в экспрессии стероидных рецепторов и бета-казеина в разных условиях роста и в разных pgMEC. линии, полученные из тканей животных в различных физиологических состояниях.
В связи с экономической важностью для молочной промышленности и возможными рисками для здоровья и качества молока потребителей существует большой интерес к пониманию и повышению естественного иммунитета молочной железы.Эпителиальные клетки молочных желез способны к врожденному иммунному ответу во время интрамаммарных инфекций и представляют собой важный барьер против вторжения патогенов.
У мелких жвачных животных на коагулазонегативные стафилококки приходится большинство случаев мастита, за ними следуют стрептококки, золотистый стафилококк, и другие бактерии [23]. Кроме того, инфекционная агалактия, вызываемая Mycoplasma agalactiae ( млн лет назад, ), является частой причиной интрамаммарных инфекций (заразная агалактия), особенно в регионах Средиземноморья [24].Линии клеток молочной железы часто используются для изучения иммунного ответа на мастит вместо инфекций in vivo . В нашем исследовании секвенирование следующего поколения (NGS) использовалось для оценки полнотранскриптомного ответа Ma -инфицированных pgMECs через 3, 12 и 24 часа после инфицирования [25].
Результаты показывают, что инфекция вызывала врожденный иммунный ответ в инфицированных клетках. PgMEC были способны распознавать патогенную инфекцию и реагировать на нее (рис. 7). PgMEC реагировали индуцированной экспрессией цитокинов (интерлейкинов и хемокинов) и других хемотаксических агентов, активацией системы комплемента, путей апоптоза и индукцией генов, кодирующих противомикробные препараты. эффекторные молекулы (например,г. дефенсины, лизоцим и синтаза оксида азота) (рис. 7A). Изменения экспрессии были умеренными, без фенотипически видимых изменений морфологии клеток, что соответствует субклиническому течению контагиозной агалактии in vivo . Анализ обогащения путей показал, что наиболее затронутые пути были связаны с иммунным ответом, метаболизмом стероидов и жирных кислот, передачей сигналов апоптоза, регуляцией транскрипции и регуляцией клеточного цикла. Мы предполагаем, что физиологически вклад in vivo в иммунитет pgMECs важен для набора нейтрофилов, активации системы комплемента и путей апоптоза, а также для экспрессии нескольких бактерицидных молекул (рис. 7B) [25].
Транскриптомные исследования pgMEC, инфицированных Mycoplasma agalactiae (изменено из [25]). (A) Индукция иммуноассоциированных генов интерлейкина 8 (IL8), хемокина (мотив C-X-C) лиганда 5 (CXCL5), Toll-подобного рецептора 2 (TLR2) и кальций-связывающего белка 9 S100 (S100A9). (B) Возможные механизмы иммунного ответа в pgMEC, предложенные на основе дифференциальной экспрессии генов и анализа генетических сетей и метаболических путей.
Экспрессия белков молока и появление капель молока, содержащих липиды, являются признаками лактогенной дифференцировки культуры клеток молочных желез.Лактогенная дифференциация зависит от множества факторов. Чтобы определить, способны ли производные pgMEC к лактогенной дифференцировке, мы провели скрининг на экспрессию бета-казеина, самого распространенного белка в козьем молоке, и окрашивали предполагаемые капли молока на наличие липидов, используя Oil Red O.
Несколько линий pgMEC из ткани молочной железы животных в разных физиологических состояниях (разные стадии лактации и молодые козы) были созданы и выращены в разных условиях роста (основных и лактирующих).Мы наблюдали различную морфологию, экспрессию стероидных рецепторов (эстроген и прогестерон) и экспрессию бета-казеина (CSN2) и пытались оценить влияние различных условий роста (среда, поверхность роста и плотность клеток) и донорской ткани на характеристики производные клеточные линии. Было показано, что первичные клетки молочной железы быстро теряют экспрессию стероидных рецепторов [26] и казеина [27] при выращивании в монослое на пластике, тогда как рост на внеклеточных матрицах должен обеспечивать базально-апикальную поляризацию эпителиальных клеток, необходимую для сохранения определенных характеристик. или для обеспечения надлежащей дифференциации и синтеза компонентов молока [28, 29].
Морфология различалась между производными первичными культурами, полученными из ткани молочной железы коз в различных физиологических состояниях. Клетки одной и той же первичной клеточной линии, выращенные в разных условиях роста, также имели морфологические различия (рис. 8). Когда клетки выращивали до слияния в лактогенной среде, в pgMEC, происходящих из ткани лактации, образовывались куполообразные и ацинеподобные структуры. Такие структуры не появляются в pgMECs, полученных из ткани молоди коз, выращенных в тех же условиях.Однако структуры, похожие на просвет и молочные капли, образовывались только в pgMECs, полученных от молоди коз, выращенных на лактогенной среде.
Морфология различных линий pgMEC в лактогенных условиях (фото: J. Ogorevc). Куполообразные (A) и ацинеподобные структуры (B) были сформированы в pgMECs, полученных из ткани лактирующей молочной железы (40-кратное увеличение; масштабные линейки = 200 мкм). Вакуоли, напоминающие молочные капли (стрелка) и просветные структуры (наконечники стрелок), образовывались в pgMECs, полученных от молоди коз (увеличение 200 ×; масштабная линейка = 50 мкм).
Терминальная дифференцировка эпителиальных клеток молочных желез необходима для секреции молока клетками просвета. Эстроген и прогестерон являются важными гормонами в развитии молочных желез и дифференцировке клеток молочных желез. Роль эстрогена и прогестерона в морфогенезе хорошо известна [12], но их роль во время лактации не ясна. Функция гормонов опосредуется рецепторами эстрогена (ESR) и прогестерона (PR), которые в лигированной форме мигрируют в ядро и действуют как факторы транскрипции для различных генов.Исследования показывают, что ESR1 и PR (ко) экспрессируются в эпителиальных клетках молочной железы [30], где они участвуют в регуляции дифференцировки и контроле баланса между просветными и базальными эпителиальными клетками молочной железы, опосредованного паракринной передачей сигналов между соседними клетками [31, 32] . Большинство ESR1- и PR-позитивных клеток экспрессируют маркеры люминального клона [33], тогда как отсутствие ESR и PR типично для недифференцированных клеток-предшественников молочной железы [34]. Неясные механизмы, с помощью которых гормональное действие регулирует предопределение клонов и пролиферацию клеток, мешают нашему пониманию дифференцировки молочных желез, что потенциально полезно для увеличения выработки молока, а также для лучшего понимания злокачественных трансформаций в клетках молочных желез.
Мы количественно оценили экспрессию стероидных рецепторов в различных линиях pgMEC, выращенных в разных условиях [35]. Клеточные линии, полученные из ткани молочной железы нелактирующих животных, демонстрировали более высокую относительную экспрессию ESR1 (примерно в 50 раз) и PGR (примерно в 8 раз) по сравнению с клетками, полученными из ткани лактирующих коз. Ответом на лактогенные условия была различная повышающая регуляция (от 1,4 до 12 раз) ESR1 и последовательная (приблизительно 3-кратная) понижающая регуляция PGR.Используя иммуноокрашивание, мы идентифицировали эпителиальные клетки, отрицательные для обоих рецепторов, положительные только для ER-α или PR, а также клетки, коэкспрессирующие оба рецептора. ER-α и PR в основном локализовались в ядрах и частично в цитоплазме клеток. Множественное окрашивание люминальными (CK18) или базальными (CK14) маркерами показало, что не все ER-α-положительные или PR-положительные маркеры принадлежат к люминальному клону и что не все просветные клетки являются ER-α и / или PR. -положительный (рисунок 9). Похоже, что лактогенные условия вызывали дифференцировку и пролиферацию люминального клона и что ER-α может участвовать в функциональной дифференцировке люминальных клеток молочной железы.
Иммунофлуоресцентное двойное окрашивание линий pgMEC при увеличении 200 × (фото: J. Ogorevc). Ядра контрастировали DAPI (синий). (A) ER-α (зеленый), локализованный в основном в ядрах CK18-положительных (красных) клеток. Также можно наблюдать CK18-отрицательные клетки с ядерным окрашиванием против ER-α. (B) PR-положительные (зеленый) и PR-отрицательные люминальные (красный — CK18-положительные) клетки. (C) Ядерная колокализация ER-α и PR (оранжевый) и клеток, положительных только для ER-α (зеленый) или PR (красный).
Экспрессия казеинов была обнаружена в различных первичных и иммортализованных клеточных линиях молочной железы разных видов. Например, мышиные клетки HC11 [36], несколько линий клеток молочной железы крупного рогатого скота [15, 28, 37, 38, 39] и первичные клетки молочной железы коз [8, 18, 40] способны экспрессировать казеины. Транскрипция CSN2 была изучена в клетках мыши HC11, и авторы [41] обнаружили, что его экспрессия синергетически индуцируется комбинацией лактогенных гормонов, местных факторов роста и взаимодействий клетка-клетка и клетка-субстрат.
Мы оценили, как исходный тканевый материал, добавление гормонов (инсулина, гидрокортизона и пролактина) в питательную среду и рост на коммерчески полученной матрице внеклеточной базальной мембраны влияют на относительную экспрессию бета-казеина [42], определенную с помощью RT- КПЦР (рис. 10А). Транскрипты CSN2 были обнаружены во всех образцах, включая клетки, происходящие от нелактирующей козы, выращенные в основной среде. Однако экспрессия CSN2 и реакция на разные условия роста были разными в отдельных клеточных линиях.Интересно, что мы обнаружили, что экспрессия CSN2 была максимальной в pgMECs, полученных от молодых коз, выращенных в лактогенной среде. Добавление гормонов в большинстве случаев индуцировало экспрессию CSN2. Влияние ростовой поверхности, покрытой матриксом внеклеточной мембраны (в нашем случае Geltrex), было различным. Мы обнаружили, что поверхность роста внеклеточного мембранного матрикса не является обязательной для экспрессии казеина в клеточных линиях. В некоторых клеточных линиях мембранный матрикс значительно увеличивал экспрессию CSN2, тогда как в других он не оказывал статистически значимого эффекта (в некоторых случаях экспрессия CSN2 была даже ниже [незначительно] в pgMECs, выращенных на мембранном матриксе).Мы предполагаем, что некоторые типы клеток, присутствующие в гетерогенной смеси культур клеток, способны продуцировать внеклеточный матрикс в количествах, достаточных для того, чтобы клетки просвета могли достичь способности к лактации. Ранее сообщалось, что мышиные клетки HC11 могут продуцировать внеклеточный матрикс [43] и не требуют дополнительной матрицы для экспрессии CSN2 [36].
Для начала лактации необходимы сложные регуляторные механизмы, которые включают функциональную дифференциацию / пролиферацию клеток молочной железы и значительные анатомические и физиологические нарушения тканей во время беременности.Интересно, что молочные белки могут быть обнаружены в pgMEC уже после нескольких дней роста в культуре клеток, даже если они получены из тканей нелактирующих животных. Похоже, что pgMECs способны к терминальной дифференцировке от базальных до секреторных клеток за короткий период времени при выращивании в среде, обеспечивающей лактогенную дифференцировку. CSN2 был локализован в основном в кольцевых (подобных просвету) структурах, образованных только pgMECs, выращенными в лактогенных условиях (Рисунок 10B). В заключение, экспрессия CSN2 в pgMEC варьируется и зависит в основном от исходного тканевого материала и условий роста.
Экспрессия мРНК CSN2 и локализация белка в pgMEC (фото: J. Ogorevc). (A) График амплификации RT-qPCR для содержания GAPDH и CSN2 в трех различных линиях pgMEC. (B) Бета-казеин присутствовал в линиях pgMEC и локализовался в основном в вакуолях (структурах, подобных просвету), образованных только в условиях, вызывающих лактацию (увеличение 200 ×; масштабная полоса = 50 мкм).
Экспрессия стероидных рецепторов и бета-казеина была самой высокой в ювенильных pgMECs, происходящих из ткани молочной железы, что может указывать на возможную роль ER и PR в лактогенной дифференцировке и пролиферации эпителиальных клеток молочных желез.Исследования на людях показывают, что ER- / PR-положительные клетки молочной железы представляют собой ранние потомства молочной железы и регулируют дифференцировку ER-отрицательных предшественников молочной железы, из которых произошли базальные / миоэпителиальные клетки, и ER-положительных бипотентных предшественников, которые могут давать начало просветным и миоэпителиальным клеткам. миоэпителиальная линия [33, 44]. Было бы разумно, что фракции предшественников обогащены ювенильной тканью молочных желез (и производными pgMECs), где лактогенная дифференцировка еще не произошла. Prpar и его коллеги [10] сообщили о существовании различных предшественников молочной железы у коз, ограниченных просветом, ограниченных миоэпителием и бипотентных, и показали, что ткань животных на пике лактации и молодых животных содержала наибольшее количество предшественников просвета, тогда как ткань в начале инволюции содержала в основном миоэпителиальные предшественники.По нашему опыту, ткань молодых нелактирующих (молодых) коз кажется более подходящей для приготовления компетентных в отношении лактации культур клеток, чем ткань лактирующих или инвазивных животных. Подобное было также предложено в случае первичных клеток молочной железы крупного рогатого скота и приписано лучшей способности таких клеток к пролиферации [38].
Описано развитие первичных клеточных линий из тканей молочной железы лактирующих, ювенильных и инволютивных коз.